论文部分内容阅读
高血压是临床上最常见的心血管疾病之一。具有发病率高和致死率高等特点。最近的研究发现，高血压人群大多数都伴有体内代谢的异常，包括高血糖，高胰岛素血，高血脂，肥胖，糖耐量减低等症状。代谢紊乱加重高血压血管病变，促进血管内皮损伤。人们认为胰岛素抵抗是高血压代谢失调的基础因素，由此将胰岛素抵抗和高血压联系在了一起。近些年来，大量研究证据表明胰岛素抵抗和高血压互为因果相互影响加重了血管内皮损伤，导致血管结构功能的异常，引起组织和靶器官的损害。因此对高血压降压治疗的同时，改善胰岛素抵抗可以显著保护血管内皮细胞减轻内皮损伤，为高血压病的预防和治疗提供了新的思路。α-亚麻酸是一种植物来源的多不饱和脂肪酸，与来其他源于海产品提取物的EPA和DHA一样，均属于ω-3多不饱和脂肪酸的一种。但是与EPA和DHA相比，它又具有价格低廉，可获得性广泛的优势。大量的研究发现膳食中添加α-亚麻酸可以预防和治疗多种心血管疾病。α-亚麻酸具有降低血脂，降低血压，减轻炎症，抗血小板聚集，抑制血栓形成等多种生理作用。但是关于α-亚麻酸的心血管保护作用也存在争议，其相关的信号转导机制目前尚不明确。实验分为三部分：第一部分：α-亚麻酸对果糖诱导的高血压胰岛素抵抗大鼠各项代谢指标的影响。目的：观察α-亚麻酸是否改善高血压胰岛素抵抗和代谢紊乱。方法：首先按照文献方法成功构建果糖诱导的高血压胰岛素抵抗模型。将40只雄性SD大鼠适应性喂养1周后，随机分成四组，空白对照组，果糖喂养组，α-亚麻酸干预组和α-亚麻酸喂养组，4周后，对各项指标进行检测。大鼠禁食禁水12小时，称重，测血压，断头处死，收集血液，分离血清，送检，检测血中甘油三酯、总胆固醇、血糖、胰岛素。放射免疫法检测血清AngII，通过试剂盒检测血清NO、MDA、SOD以及CAT的水平。实验结果：（1）各组间大鼠体重及血清总胆固醇水平与对空白对照组相比没有明显差异，但是果糖喂养组收缩压、舒张压、空腹血糖、血清胰岛素、血清甘油三脂及胰岛素抵抗指数与空白对照组相比均明显升高，给予α-亚麻酸膳食干预治疗可以降低上述指标（2）果糖喂养组大鼠与空白对照组相比，血清MDA及AngII升高，SOD、CAT、NO水平显著下降，α-亚麻酸膳食干预治疗可以使SOD、CAT、NO水平回升，MDA及血清AngⅡ表达水平有所降低。上述指标在空白对照组及α-亚麻酸喂养组之间无明显差异。结论：验证了α-亚麻酸可以减轻胰岛素抵抗，降低血压，增强机体对胰岛素的敏感性和抗氧化能力，改善代谢紊乱。第二部分：α-亚麻酸对高血压胰岛素抵抗大鼠血管舒张功能的保护作用目的：明确α-亚麻酸能否改善高血压胰岛素抵抗大鼠血管舒张功能，是否通过胰岛素下游通路IRS-1/AKT发挥改善内皮依赖的舒张作用实验方法：按照文献方法成功构建果糖诱导的高血压胰岛素抵抗大鼠模型。将SD大鼠断头处死后分离胸主动脉，制作主动脉环，用于血管舒张功能检测。分别观察不同浓度的Ach和胰岛素作用下的血管舒张功能的变化。HE染色观察主动脉血管环形态学改变，WesternBlot检测IRS-1和Akt蛋白磷酸化水平变化实验结果：果糖喂养组大鼠血管内皮依赖的舒张功能较对照组相比明显下降，α-亚麻酸干预组与果糖喂养组相比，内皮依赖的血管舒张功能明显改善，内皮细胞对胰岛素的敏感性增强促进了胰岛素诱导的血管舒张功能。HE染色显示，α-亚麻酸的膳食干预可以减轻果糖喂养组造成的平滑肌增生，中膜增厚等动脉血管组织学病理改变。Westernblot检测示：与正常对照组相比，IRS-1蛋白磷酸化水平在果糖喂养组明显升高，α-亚麻酸可以明显降低IRS-1的磷酸化程度。而Akt蛋白磷酸化水平在果糖喂养组较正常对照组明显降低，而α-亚麻酸显著提高了Akt的磷酸化水平。结论：α-亚麻酸对高血压胰岛素抵抗大鼠血管内皮依赖的舒张功能具有明显改善作用，还可以增强内皮对胰岛素的敏感性，胰岛素介导的IRS-1/Akt信号转导通路可能参与其中。第三部分：α-亚麻酸抑制AngⅡ诱导的内皮细胞凋亡作用及机制目的：明确α-亚麻酸是否能抑制AngⅡ诱导的内皮细胞凋亡，探讨可能参与的信号转导分子实验方法：将培养良好的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)用于实验。用AngⅡ诱导内皮细胞凋亡。通过MTT法检测细胞活力,筛选AngⅡ的最佳诱导浓度为10-6mol/L，α-亚麻酸最适效应浓度为50μ mol/l，观察时间点设为24h。首先将细胞分为四组：空白对照组，AngⅡ诱导组，angII+α-亚麻酸组和α-亚麻酸组。通过试剂盒检测细胞培养上清MDA、SOD、CAT和NO的表达水平。分别通过Tunel法和流式细胞计数法检测各组内皮细胞的凋亡率。另外使用PI3K/Akt抑制剂LY294002对细胞进行处理后再检测上述指标。使用Western Bolt检测p-Akt和下游分子caspase3的表达变化。实验结果：α-亚麻酸干预后可以降低AngⅡ诱导内皮细胞的MDA的增高，增加SOD、CAT和NO的表达，显著降低AngⅡ诱导的内皮细胞凋亡水平。α-亚麻酸+angII组中p-Akt表达增高，IRS-1蛋白磷酸化水平及caspase3的表达降低。给予p-Akt抑制剂LY294002处理后能够明显减弱α-亚麻酸的抗凋亡作用，细胞凋亡率和下游信号分子caspase3表达升高。结论：α-亚麻酸可以抑制AngⅡ诱导的内皮凋亡，p-Akt及下游caspase3共同参与了这一作用的实现。