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目的：探讨树突状细胞培养方法，TAK1信号通路在DC分化、发育及1型糖尿病（type1 diabetes mellitus，T1DM）发病过程中的分子作用机制。通过体外培养骨髓来源的DC，从形态学、表型及功能给予鉴定，进而建立体外培养DC的方法。通过体外观察TAK1抑制剂（5z-7-oxozeaenol）对DC形态学、凋亡、表型、功能以及蛋白TLR4、TAK1、JNK、AP-1及NF-κB表达水平的影响；体内观察TAK1抑制剂对T1DM小鼠的治疗作用，明确其治疗T1DM的作用及可能的分子作用机制；观察TAK1抑制剂作用的DC在T1DM小鼠中的作用，从而进一步明确TAK1抑制剂是否通过DC在T1DM发病过程中的发挥作用。 方法：(1)体外分离C57BL/6小鼠的骨髓，制取细胞悬液，通过加入不同刺激因子如巨噬细胞粒细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony stimulating factor，GM-CSF）、白介素-4（Interleukin-4，IL-4）进行干预，于实验第7天通过检测CD11c的表达观察不同培养条件下小鼠骨髓源细胞向DC分化情况及检测CD86，MHC-Ⅱ的表达和当DC与脾淋巴细胞比例为1:20时进行混合淋巴细胞反应来观察对DC功能的影响。 (2)通过上述培养条件下培养的C57BL/6小鼠骨髓源DC，于实验第6、7天分别加入LPS作用24h及不同剂量的TAK1抑制剂（0.9μg.ml-1、1.8μg.ml-1）作用4h后于显微镜下观察细胞形态，收集细胞，取部分细胞用于检测其表面抗原CD11c、MHC-Ⅱ和CD86的阳性表达率、凋亡情况及检测TAK1抑制剂对DC刺激同种异体脾淋巴细胞增殖活性的影响，另取部分细胞用于检测其对TLR4、TAK1、JNK、AP-1及NF-κB蛋白表达的影响。 (3)C57BL/6小鼠在SPF环境中适应性培养1周后，于腹腔连续5次注射小剂量链脲佐菌素（40 mg.kg-1，STZ）溶液，注射完72小时后，测定血糖，小鼠血糖≥16.7 mmol.l-1，即判断T1DM造模成功。造模成功后将小鼠随机分为：正常对照组、模型组、TAK1抑制剂高剂量组（75μg.kg-1）、TAK1抑制剂低剂量组（37.5μg.kg-1）。小鼠于造模当天给予相应的TAK1抑制剂，每周给药1次，连续4周。每周检测血糖及体重1次。末次给药后，观察一段时间，于实验的第44天将小鼠安乐死，分离脾脏和骨髓，制取淋巴细胞悬液，检测小鼠T、B淋巴细胞的增殖能力及骨髓来源DC表型和功能的影响。取部分胰腺用于HE染色，观察小鼠胰岛β细胞的炎性浸润情况。另取部分胰腺和脾脏用于检测其对TAK1、JN K和N F-κB蛋白表达的影响。 (4)于C57BL/6小鼠造模，造模完成后当天给予处理过的DC细胞，每周检测血糖及体重1次，实验的第42天处死小鼠，分离脾脏制取淋巴细胞悬液，检测小鼠T、B淋巴细胞的增殖能力。另取部分胰腺和脾脏用于Wester nblot检测其对蛋白TAK1、JNK和NF-κB的影响。 结果：(1)GM-CSF能够促进骨髓来源的细胞向DC分化，IL-4主要能够影响已分化DC的成熟程度，不能够促进骨髓来源细胞向DC分化。 (2) TAK1抑制剂能够明显促进DC的凋亡，且其能够下调DC表面共刺激分子CD86及MHC-Ⅱ的阳性表达率，呈现一定的剂量依赖性；其并能够下调 DC对同种淋巴细胞增殖的能力。TAK1抑制剂能够剂量依赖性下调TLR4、TAK1和N F-κB的表达，且一定程度的上调JN K和AP-1的表达。 (3)采用STZ可以建立C57BL/6小鼠T1DM模型，表现为小鼠血糖水平≥16.7 mmol.l-1，多饮，多尿。与模型组相比，给药组小鼠体重无明显变化。与模型组比较，给药组小鼠血糖水平明显降低（P<0.05）。在脾脏T、B淋巴细胞增殖实验中，与T1DM模型组相比，TAK1抑制剂显示出较为明显的剂量依赖性抑制T淋巴细胞增殖的作用（P<0.05），对B淋巴细胞无明显影响；混合淋巴细胞反应显示，与T1DM模型组比较，给药组小鼠DC在20:1的刺激比下可剂量依赖性的降低对同种异体T淋巴细胞的增殖作用；FACS结果显示，与T1DM模型组比较，给药组小鼠DC表面抗原刺激分子CD86、MHC-Ⅱ的表达明显下降，且呈现一定的剂量依赖性。与模型比较，TAK1抑制剂能够减轻胰岛β细胞的炎性浸润，且呈现剂量依赖性。与模型组相比，给药组小鼠体内TAK1和NF-κB的表达明显降低，JNK的表达明显升高。 (4)与模型组比较，各DC组小鼠体重无明显差异，血糖高于模型组。在脾脏T、B淋巴细胞增殖实验中，与模型组比较，给予DC后对T淋巴细胞增殖明显增加。在蛋白检测实验中，与空白组比较，模型组及DC组小鼠体内TAK1、JNK表达无明显变化，NF-κB的表达水平明显增加。 结论：(1)综上所述，加入GM-CSF为骨髓来源DC最佳体外培养条件，且为后续的实验提供一定的理论依据。 (2)TAK1信号通路在DC存活中扮演着重要的角色，TAK1抑制剂能够通过影响DC的功能及其下游蛋白的表达来发挥抗炎及免疫调节的作用。 (3)TAK1抑制剂能够通过免疫抑制发挥抗小鼠T1DM的作用，且停药后效果良好。且对DC细胞的刺激功能有较强的抑制作用，提示其可能通过诱导免疫耐受发挥疗效。 (4)过继转移TAK1抑制剂作用的DC促进了T1DM小鼠的免疫及炎症反应。