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研究目的：
1.本研究尝试制备一种以叶酸为靶向分子、同时兼具MR诊断、化疗及光热治疗的肿瘤微环境响应性多功能纳米诊疗探针并对其理化性质及显像能力进行研究。
2.通过体外细胞实验，探讨该探针对肿瘤细胞（HepG2）的化疗及光热治疗作用。
研究方法：
通过己内酯(ε-CL)的开环聚合反应、点击化学反应等方法制备一系列不同结构的聚乙二醇/聚己内酯嵌段聚合物。并通过化学反应引入具有肿瘤靶向功能的叶酸或肿瘤微环境响应的二硫键结构实现聚乙二醇/聚己内酯嵌段聚合物的功能化。所得聚合物具有两亲性行为，在水溶液中可通过自组装形成纳米探针。基于该嵌段聚合物的两亲性行为，可通过透析法将疏水性超顺磁性氧化铁（SPIO）、抗肿瘤药物甲氨蝶呤（MTX）及光热治疗剂（IR780）包载于聚合物的疏水内核中，制成肿瘤靶向的多功能诊疗一体化纳米探针FA-PEG-SS-PCL@SPIO/MTX/IR780。
通过1HNMR和FTIR对FA-PEG-SS-PCL@SPIO/MTX/IR780进行表征；分别用透射电镜及动态光散射测定探针的表面形貌、粒径及粒径分布；对MTX、SPIO及IR780的包载率进行测定；对该探针的生物响应性进行研究；通过体外MR显像检测探针的T2对比效果。
体外细胞实验中，用CCK-8法评价FA-PEG-SS-PCL的细胞毒性及探针FA-PEG-SS-PCL@SPIO/MTX/IR780在光照及非光照条件下的HepG2细胞杀伤力。通过普鲁士蓝染色验证探针对细胞的靶向性。通过Calcein-AM/PI染色评价与不同浓度的探针孵育及经光照与非光照处理后细胞的生存情况。AnnexinⅤ-FITC/PI双染并应用流式细胞术分析与不同浓度的探针孵育且光照后，细胞的总体生存率。
研究结果：
1.1HNMR和FTIR结果证实FA-PEG-SS-PCL制备成功。DLS测得所制备的诊疗探针FA-PEG-SS-PCL的平均粒径为100nm；FA-PEG-SS-PCL@SPIO/IR780的平均粒径为105nm；FA-PEG-SS-PCL@SPIO/MTX/IR780的平均粒径为120nm。TEM下观察所得到的探针呈均一的球状结构，具有较高稳定性及药物负载能力。体外药物释放实验证实了细胞在GSH较高浓度的溶液中，药物释放增多、增快。
2.体外MR成像结果显示：随着Fe离子浓度的逐渐增加，FA-PEG-SS-PCL@SPIO/MTX/IR780探针的T2WI信号逐渐减低；证明了其优良的T2对比效果。
3.细胞毒性实验结果：空白载体FA-PEG-SS-PCL对细胞毒性低，生物相容性良好。探针FA-PEG-SS-PCL@SPIO/MTX/IR780配置成不同浓度的溶液，与HepG2细胞共孵育24h后，进行光照与非光照处理，CCK-8法测得细胞生存率与药物浓度成反比关系，随着药物浓度升高，细胞生长抑制作用越显著，光照处理组较非光照处理组死亡率更高。
4.普鲁士蓝染色实验证实了FA靶向的探针与非FA靶向的探针相比具有更高的细胞摄取。
5.Calcein-AM/PI染色分析结果显示，FA-PEG-SS-PCL@SPIO/MTX/IR780探针浓度越高，对HepG2细胞杀伤作用更强，并且光照组较非光照组有更强的抗肿瘤效应。AnnexinV-FITC/PI双染验证了在光照条件下，随着探针浓度增加，细胞死亡率增高、死亡速度加快。
结论：
1.本研究成功制备了一种新型的兼具MR诊断、化疗及光疗为一体的、肝癌主动靶向性的多功能诊疗一体化纳米诊疗探针，FA-PEG-SS-PCL@SPIO/MTX/IR780。
2.制备的诊疗探针呈球形，大小均一，粒径较小，具有良好的生物相容性、稳定性、环境响应性、药物包载率及抗肿瘤效应，可用于MR显影，具有一定的潜在应用前景。
1.本研究尝试制备一种以叶酸为靶向分子、同时兼具MR诊断、化疗及光热治疗的肿瘤微环境响应性多功能纳米诊疗探针并对其理化性质及显像能力进行研究。
2.通过体外细胞实验，探讨该探针对肿瘤细胞（HepG2）的化疗及光热治疗作用。
研究方法：
通过己内酯(ε-CL)的开环聚合反应、点击化学反应等方法制备一系列不同结构的聚乙二醇/聚己内酯嵌段聚合物。并通过化学反应引入具有肿瘤靶向功能的叶酸或肿瘤微环境响应的二硫键结构实现聚乙二醇/聚己内酯嵌段聚合物的功能化。所得聚合物具有两亲性行为，在水溶液中可通过自组装形成纳米探针。基于该嵌段聚合物的两亲性行为，可通过透析法将疏水性超顺磁性氧化铁（SPIO）、抗肿瘤药物甲氨蝶呤（MTX）及光热治疗剂（IR780）包载于聚合物的疏水内核中，制成肿瘤靶向的多功能诊疗一体化纳米探针FA-PEG-SS-PCL@SPIO/MTX/IR780。
通过1HNMR和FTIR对FA-PEG-SS-PCL@SPIO/MTX/IR780进行表征；分别用透射电镜及动态光散射测定探针的表面形貌、粒径及粒径分布；对MTX、SPIO及IR780的包载率进行测定；对该探针的生物响应性进行研究；通过体外MR显像检测探针的T2对比效果。
体外细胞实验中，用CCK-8法评价FA-PEG-SS-PCL的细胞毒性及探针FA-PEG-SS-PCL@SPIO/MTX/IR780在光照及非光照条件下的HepG2细胞杀伤力。通过普鲁士蓝染色验证探针对细胞的靶向性。通过Calcein-AM/PI染色评价与不同浓度的探针孵育及经光照与非光照处理后细胞的生存情况。AnnexinⅤ-FITC/PI双染并应用流式细胞术分析与不同浓度的探针孵育且光照后，细胞的总体生存率。
研究结果：
1.1HNMR和FTIR结果证实FA-PEG-SS-PCL制备成功。DLS测得所制备的诊疗探针FA-PEG-SS-PCL的平均粒径为100nm；FA-PEG-SS-PCL@SPIO/IR780的平均粒径为105nm；FA-PEG-SS-PCL@SPIO/MTX/IR780的平均粒径为120nm。TEM下观察所得到的探针呈均一的球状结构，具有较高稳定性及药物负载能力。体外药物释放实验证实了细胞在GSH较高浓度的溶液中，药物释放增多、增快。
2.体外MR成像结果显示：随着Fe离子浓度的逐渐增加，FA-PEG-SS-PCL@SPIO/MTX/IR780探针的T2WI信号逐渐减低；证明了其优良的T2对比效果。
3.细胞毒性实验结果：空白载体FA-PEG-SS-PCL对细胞毒性低，生物相容性良好。探针FA-PEG-SS-PCL@SPIO/MTX/IR780配置成不同浓度的溶液，与HepG2细胞共孵育24h后，进行光照与非光照处理，CCK-8法测得细胞生存率与药物浓度成反比关系，随着药物浓度升高，细胞生长抑制作用越显著，光照处理组较非光照处理组死亡率更高。
4.普鲁士蓝染色实验证实了FA靶向的探针与非FA靶向的探针相比具有更高的细胞摄取。
5.Calcein-AM/PI染色分析结果显示，FA-PEG-SS-PCL@SPIO/MTX/IR780探针浓度越高，对HepG2细胞杀伤作用更强，并且光照组较非光照组有更强的抗肿瘤效应。AnnexinV-FITC/PI双染验证了在光照条件下，随着探针浓度增加，细胞死亡率增高、死亡速度加快。
结论：
1.本研究成功制备了一种新型的兼具MR诊断、化疗及光疗为一体的、肝癌主动靶向性的多功能诊疗一体化纳米诊疗探针，FA-PEG-SS-PCL@SPIO/MTX/IR780。
2.制备的诊疗探针呈球形，大小均一，粒径较小，具有良好的生物相容性、稳定性、环境响应性、药物包载率及抗肿瘤效应，可用于MR显影，具有一定的潜在应用前景。