论文部分内容阅读
黑虎掌菌学名枣翘鳞肉齿菌(Sarcodon imbricatus (L.ex Fr.) Karst.),是一种可食用和药用的真菌,隶属于担子菌纲多孔菌科多孔菌属,是滇黔藏地区独有的天然黑色真菌,具有很高的食补价值。目前对黑虎掌菌的研究主要侧重于黑虎掌菌粗多糖的抗菌作用和体内抗肿瘤作用,纯化多糖的结构研究和在体外对肿瘤细胞的抑制作用的差异研究还未见报道。本课题以黑虎掌菌为原料,对黑虎掌菌干品中的营养成分、黑虎掌菌多糖的分离纯化、结构表征和抗肿瘤活性进行了研究,主要研究结果如下:黑虎掌菌干品中的蛋白质含量为12.66%,脂肪含量为2.57%,灰分为9.56%,水分为7.83%,总碳水化合物为67%。常量元素磷和钾含量最多,约为20000 mg/kg,镁含量为751.55 mg/kg;微量元素中铁为318.07 mg/kg,锌为116.77 mg/kg,锰、铜、硼也有一定含量。黑虎掌菌中共含有17种氨基酸,总含量为9888.83 mg/100 g,其中人体必需氨基酸占33.77%。用热水提取黑虎掌菌多糖,经过醇沉、除蛋白、脱色得到黑虎掌菌多糖SIP,SIP经过DE-52离子交换柱层析、Sepharose CL-6B进行凝胶柱层析分离后得到六个纯化多糖:SIP-1-1、SIP-1-2、SIP-2-1、SIP-2-2、SIP-3-1和SIP-3-2,GPC和Sepharose CL-6B凝胶柱层析鉴定六个多糖样品都是单一成分,重均分子量分别为2.12×10~5 Da、1.21×10~4 Da、4.55×10~5 Da、1.23×10~4 Da、7.45×10~5 Da和1.19×10~4 Da。红外、紫外、气相色谱分析显示,黑虎掌菌纯化多糖SIP-1-1、SIP-1-2、SIP-2-1、SIP-2-2、SIP-3-1和SIP-3-2不含核酸和蛋白质,都含有3418～3405 cm-1处的O-H伸缩振动、2932～2927 cm-1处的C-H伸缩振动以及1430～1200 cm-1处的一组羧基的伸缩振动,这些都是多糖的特征红外吸收。多糖的单糖组成分析结果:SIP中含有岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,摩尔比为:岩藻糖:甘露糖:葡萄糖:半乳糖=3.7:1:20.17:12.49;SIP-1-1、SIP-2-1和SIP-3-1只含有葡萄糖;SIP-1-2和SIP-2-2都含有岩藻糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖,以半乳糖为主;SIP-3-2含有葡萄糖和半乳糖。选用人肝癌Hep G2细胞、人卵巢癌细胞HO-8910和人乳腺癌细胞BT-474三种肿瘤细胞体外增殖抑制实验作黑虎掌菌多糖SIP、SIP-1-1、SIP-1-2、SIP-2-1、SIP-2-2、SIP-3-1和SIP-3-2的抗肿瘤活性筛选,大部分黑虎掌菌多糖对三种肿瘤细胞都具有较强的抑制作用,且呈剂量依赖性;其中大分子量多糖SIP-2-1和SIP-1-1对三种细胞抑制最明显,SIP-1-1在高浓度时对人乳腺癌细胞的抑制率为36.05%,未纯化多糖SIP和小分子多糖SIP-3-2抑制率较低。高碘酸氧化、Smith降解和核磁共振结果表明,黑虎掌菌多糖SIP-2-2主要为构型,少部分为β构型,C-6和C-2,C-3和C-4中都有被取代的,其糖链是以1→3位、1→4位和1→4,6位键合的半乳糖残基为主链,以1→2位和1→3位键合的岩藻糖及葡萄糖、甘露糖为支链的杂多糖。