一株产蛋白酶解淀粉芽孢杆菌的筛选鉴定及其对污水净化作用研究

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近年来,我国水产养殖业的迅速发展,集约化养殖带来经济效益的同时,由于饵料残留、排泄物积累等导致养殖水体富营养化,氨氮、亚硝酸盐等有害物质积累,毒害养殖生物,诱发水产疾病,导致水产品质量下降,制约我国水产养殖的发展。芽孢杆菌具有易于培养、适应环境能力强、生长迅速、代谢旺盛、能够产生大量的高活性胞外酶(蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等)等优点,对养殖水体中的有机物、氨氮、亚硝酸盐及硫化氢等有害物质具有较强的降解作用。本实验分离筛选出一株高产蛋白酶菌株Am11,并对其进行分子学鉴定、产酶条件优化及人工废水的净化的研究,结果如下:1)通过透明圈法初筛和酶活力测定法复筛得到一株高蛋白酶活性产生菌,通过菌落和菌体形态、生理生化实验和16S rDNA基因测序以及绘制生物进化树对菌株Am11进行了分子学鉴定,最终确定菌株Am11为解淀粉芽孢杆菌,并将其命名为解淀粉芽孢杆菌Am11((Bacillus amyloliquefaciens Am11)。2)在实验室摇瓶发酵的基础上,采用单因素实验探究菌株Am11菌株最适产酶条件为:温度35℃,pH值7.5,接种量8%,并且菌株Am11在NaCl浓度为3%时,所产蛋白酶活性保持了初始酶活的93%。菌株Am11的最佳发酵碳源为酵母粉,以酵母粉为发酵碳源时,所产蛋白酶活力为97.9 U/ml;菌株Am11的最佳发酵氮源为酪素,以酪素为发酵氮源时,所产蛋白酶活力为103.3 U/ml;Mn2+、Mg2+、Ca2+离子可以提高菌株Am11所产蛋白酶活力。3)利用南美白对虾饲料人工模拟富含有机物的废水,研究了菌株Am11对模拟废水中蛋白质、淀粉和CODMn的降解效果。结果表明,经活化的菌液,在48 h后对饲料残饵中蛋白质、淀粉和CODMn的降解率分别为57%、52%、55%。分别以(NH4)2SO4和NaNO2配制氨盐培养基和亚硝酸盐培养基,研究了菌株Am11对氨氮和亚硝酸盐的降解效果。结果表明,经活化的菌液,在8 h后对氨氮和亚硝酸盐的降解率分别为61%和37%,在12 h后对氨氮和亚硝酸盐的降解率分别为82%和91%,在24 h后对氨氮和亚硝酸盐的降解率分别达到了95%和97%。
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