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背景:髓鞘是神经系统独有的一种富含脂质的多层膜性结构。生理状态下,完整的髓鞘对神经细胞轴突起到保护作用。脱髓鞘病变是在病理状态下,由多种不同因素造成的髓鞘结构和功能的破坏,进而导致一系列神经症状。尽管脱髓鞘病变的病理特征已经被广泛讨论,其细胞学及分子水平的具体机制仍不明确。血小板激活因子(PAF)是一种内源性的磷脂炎性介质。生理浓度的PAF有助于维持正常的生理活动,而PAF浓度的异常升高已经被证实与多种中枢神经系统脱髓鞘疾病密切相关。尽管PAF通常被认为通过与一种特殊的G蛋白偶联七次跨膜转运受体(PAFR)相结合来发挥作用,仍然不断有研究证明该受体可能并非是PAF的唯一信号通路,在该受体缺失或被阻断的情况下,PAF的功能未能被完全阻断。在本研究中,我们假设PAF水平的上调会加重中枢神经系统脱髓鞘病变,而且PAF的这种作用并不仅仅通过其受体依赖途径调控。研究目的:通过实验探究PAF在中枢神经系统脱髓鞘病变中所起的作用以及其细胞学及分子水平的具体机制实验方法:用WT及PAFR敲除小鼠来源的小脑组织进行离体组织切片培养,用适当浓度的溶血磷脂酰胆碱(lysolecithin,LPC)在小脑组织切片中制造可逆性的脱髓鞘病变,用适当浓度的PAF制造高PAF水平的培养环境。用real-time PCR检测PAF水解酶(PLA2G7)的表达,说明脱PAFR敲除,脱髓鞘病变及高浓度PAF对内源性PAF代谢的影响;用免疫荧光染色及real-time PCR检测髓鞘的形态及髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达,说明高浓度PAF及PAFR的敲除对髓鞘损伤的影响程度;用免疫荧光染色检测CD68和离子化钙结合适配分子1(Iba1)的表达,从而说明脱髓鞘病变及高浓度PAF对小胶质细胞活动的影响;用real-time PCR检测肿瘤坏死因子α,转化生长因子β1,白介素1β及白介素6的表达,从而说明在WT及PAFR敲除的脑组织中,高浓度PAF及脱髓鞘病变对促炎因子及抗炎因子的调控作用。实验结果:1.PAF受体敲除在一定程度上降低了内源性PAF水解酶的表达。2.溶血磷脂酰胆碱可以抑制内源性PAF水解酶的表达。3.在中枢神经系统脱髓鞘病变的进展过程中,高浓度的PAF可以造成更严重的脱髓鞘病变,而PAF受体的基因敲除并未有效改善脱髓鞘病变的发展。4.高浓度的PAF通过受体依赖途径显著上调白介素1β。5.高浓度的PAF通过非受体依赖途径显著上调肿瘤坏死因子α与白介素6,同时显著下调转化生长因子β1。6.在离体的小脑组织切片培养中,高浓度PAF通过非受体依赖途径激活小胶质细胞。结论:PAF浓度的升高可以促进中枢神经系统脱髓鞘病变的进展。PAF这种作用综合了对多种促炎因子及抗炎因子的调控,且并不完全依赖于经PAF受体的传导通路。