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原发性扭转痉挛是一组由于躯干、肢体、颈部或颜面肌肉协调功能失调而出现各种姿势的异常或肢体的扭转，已有14种类型的扭转痉挛被定位。常染色体显性早发性扭转痉挛定位于9q34，是一种最常见、最为严重的扭转痉挛，1989年Ozelius等将该基因命名为DYT1，1997年又克隆出该基因，它编码332个氨基酸组成的DYT1扭转蛋白A(Torsin A)，该蛋白是腺苷三磷酸酶AAA家族的成员，一种ATP结合蛋白，它与许多细胞活动有关。DYT1基因突变可引起9q连锁的扭转痉挛。 在实验中，我们从人扭转蛋白A的编码序列中设计引物，以人肝cDNA文库作模板，成功地扩增到编码DYT1蛋白的基因片段，该片段全长939bp。将所得片段与pMD18-T载体连接，转化到JM109大肠杆菌中，从转化平板上挑出菌落，用碱裂法提取质粒，通过PCR和酶切分析，成功地筛选到阳性克隆，测序结果与文献报道结果一致。 提取质粒，用BamH I和Xho I酶切，回收目的片段，分别克隆到原核表达载体pET28a(+)和pGEX-6P-1中，转化JM109受体菌，从JM109受体菌中提出质粒，再转化到BL21(DE3)菌中，筛选出阳性克隆，成功地构建了人扭转蛋白A原核表达载体。将该工程菌接种于含有适当抗生素的LB培养基中，37℃振荡培养过夜，次日将此菌液按1：100的比例接种于250mL LB液体培养基中，37℃振荡培养，当细菌长至适当的密度时，加入IPTG(终浓度为1mM)诱导，继续培养约5h，离心收集菌体，进行SDS-PAGE，结果在两种载体中均得到了高效表达。在pET28a(+)中表达的DYTI蛋白为包含体(IBS)，经过IBS制备、蛋白质复性、金属鳌合层析纯化、superdex75凝胶过滤纯化，得到了纯的DYTI蛋白;在pGEX一6P一1中表达的DYTI蛋白与GST的融合蛋白也为IBS，但此融合蛋白复性不好，只得到极少量的融合蛋白。关键词:人;OYTI基因;扭转蛋白A;cDNA;克隆;原核表达;蛋白质纯化