枸杞多糖干预雪旺细胞在周围神经损伤修复中的研究

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目的研究枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide,LBP)对周围神经损伤修复所需的雪旺细胞(schwann cells,SCs)的生长、增值及生物活性的影响。研究LBP联合异种神经移植体(acellular nerve xenograft,ANX)修复大鼠坐骨神经缺损的效果。方法获取SD大鼠坐骨神经的SCs,使用差速贴壁法培养SD大鼠来源的SCs。将0ug/ml、50ug/ml、100ug/ml、150ug/ml、200ug/ml、250ug/ml、500ug/ml LBP与SCs混合培养,分成七组。在培养皿中培养后第1、3、5、7和9天,用CCK-8法检测各组SCs生物学活性,通过rt-PCR检测各组脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的基因表达水平,筛选最佳干预SCs的LBP浓度。在无菌条件下制备10mm坐骨神经缺损的大鼠模型,选取兔的胫神经制作ANX,将SD大鼠分为三组(n=10):ANX组、ANX-SCs组和ANX-LBP-SCs组。术后八周,检测各组患肢热刺痛、坐骨神经功能指数(Sciatic nerve function index,SFI)及神经传导速度(Motor nerve conduction velocity,MCV),另通过投射电镜比较三组模型的脱细胞异种神经移植体内的神经纤维及髓鞘再生。结果离体实验中,LBP趋于150-250ug/ml浓度与其他浓度相比有统计学意义(P<0.05),剩余各组细胞的活性在两两之间均没有统计学差异(P>0.05)。在第2-4天,七组的活性无显著差异(P>0.05)。通过rt-PCR检测200ug/ml LBP-SCs组中BDNF、NGF及bFGF的mRNA表达量高,与其他组相比具有明显统计学意义(P<0.05)。移植术后八周,发现ANX-LBP-SCs组热刺痛实验、SFI检测、神经传导速度更优。通过透射电镜检测ANX-LBP-SCs组结果显示此组髓鞘再生及神经纤维再生明显。结论1.LBP浓度为200ug/ml时,可促进SCs的增殖,并分泌大量神经营养因子;2.含有LBP干预的SCs培养体系联合ANX移植可显著促进周围神经再生。
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