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目的:利用已构建成功的、在人胰腺癌细胞系CFPAC-1中稳定抑制CDC2583的重组慢病毒,建立CDC2583表达降低的细胞系,以研究该基因的作用。
方法:将产生CDC2583 siRNA分子的携带绿色荧光蛋白(GFP)的重组慢病毒感染细胞后,用流式细胞仪筛选稳定表达GFP的细胞;应用RT-PCR和Western blot对细胞中CDC2583的mRNA和蛋白表达水平进行分析;用MTT法、流式细胞仪、平板克隆形成和Transwell小室法分别检测其对细胞增殖、周期、细胞克隆形成能力和迁移侵袭能力的影响。
结果:CDC2583 siRNA显著下调了CFPAC-1细胞中CDC2583的表达,所构建的重组慢病毒导入的siRNA有较高的沉默效率,CFPAC-1细胞的增殖能力、克隆形成能力以及迁移侵袭能力显著增强,细胞周期无明显改变。
结论:CDC2583基因可显著地影响胰腺癌CFPAC-1细胞的增殖、克隆形成和迁移侵袭能力,本研究为利用CDC2583所介导的信号通路进行肿瘤基因治疗提供了实验依据。