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目的：EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)即人类疱疹病毒4型,目前全球感染该病毒的人口大于90%。EB病毒在儿童时期常常成隐性感染,到了成人当免疫系统低下时便容易出现症状。EB病毒的检测与多种疾病有关如：致死性传染性单核细胞增多症、Burkitt淋巴瘤、霍奇金病、鼻咽癌、胃癌、唾液腺肿瘤和近来发现的出现在免疫抑制患者身上的平滑肌肿瘤等相关。在上述疾病中,EB核抗原-1(EBNA-1)是最早期表达蛋白之一,且是持续表达的蛋白。EBNA-1不仅是EB病毒有关的肿瘤标志物而且能够区分其它病原微生物感染。因此,本研究构建了一种准确、高灵敏和快速检测EBNA-1电化学免疫传感器新方法。方法：1.石墨烯-多壁碳纳米管-壳聚糖(GS-MWCNTs-Chit)纳米复合物的制备。利用一步合成法将石墨烯、多壁碳纳米管均匀分散到壳聚糖中。在纳米复合物上电沉积金纳米颗粒。使用电镜和电化学方法对合成的纳米复合物进行表征。2.多壁碳纳米管上连接DNA和多克隆抗(DNA-MWCNTs-Ab2)。DNA引发链和多克隆抗体通过原位合成法连接到多壁碳纳米管上。发卡结构的两类核酸发生核酸链杂交反应形成纳米线结构。通过原子力显微镜和电化学方法对其进行表征。3.以玻碳电极作为反应基板,5mM铁氰化钾溶液为基础反应液,在对基础反应液pH值、石墨烯与多壁碳纳米管的比例、核酸链杂交反应时间和抗原抗体孵育时间等实验条件优化后,利用差分脉冲伏安法对不同浓度的EBV核抗原1进行电化学检测,并绘制标准曲线,对此EBV核抗原1(EBNA-1)电化学免疫传感器的稳定性、灵敏度和选择性进行评估。结果：1.成功合成GS-MWCNTs纳米复合物。通过一步原位合成法合成GS-MWCNTs纳米复合物,从扫描电子显微镜下可以看到GS-MWCNTs的形态学特征。通过原子力显微镜(AFM)可以观察到MWCNTs和DNA-MWCNTs-Ab2的三维图像,表明信号放大复合物制备成功。2.所制备的免疫传感器,在最佳条件下,对目标物EBNA-1进行检测,在0.05-6.4 ng mL-1范围内信号与目标物浓度呈线性相关性,R2=0.99249,最低检测限为0.7 pg mL-1 (S/N=3),线性方程为Y=24.81X-19.11。3.该传感器性能良好：批间差异小于4.2%,批内差异小于4.0%,选择性好,最大干扰差异为4.3%。稳定性好,储存27天后,相应电流仅下降了8.1%。结论：通过将石墨烯、多壁碳纳米管、金纳米颗粒层层修饰到玻碳电极表面,来增大电极的表面积、提高电子传递能力及增加单克隆抗体的负载量,制备的免疫传感器可用于快速、超灵敏检测EBNA-1。本研究结合了免疫反应的特性与核酸杂交链反应放大系统,同时利用了纳米材料包括石墨烯、多壁碳纳米管、金纳米颗粒促进了电子传递,从而增加了免疫传感器的灵敏性具有较宽的检测范围。此种电化学免疫传感器具有特异性强、重复性好和灵敏度高等特点,为临床定量检测EBNA-1提供了有效的方法。