瘢痕疙瘩是一种发生在人类的、以异常的成纤维细胞增生为特征的良性肿瘤，表现为过度愈合的病理性瘢痕，以超出原创面边缘的瘢痕增生为特征。瘢痕疙瘩不但严重影响美观，而且可以造成严重的残疾。在创伤愈合过程中，随着炎症反应和肿瘤血管形成，在瘢痕疙瘩内可见过量的胶原细胞外基质堆积导致密度较高的瘢痕疙瘩形成。 他莫昔芬是一种人工合成的非类固醇抗雌激素，广泛用于乳腺癌的治疗。他莫昔芬的作用包括改变RNA转录的合成，抑制细胞的增殖，使细胞周期停滞于G₁期。另外，越来越多的研究表明他莫昔芬有助于治疗异常的瘢痕增生，对正常真皮层和瘢痕疙瘩的成纤维细胞的增殖都有抑制作用。p53是一种非常重要的抑癌基因，在调控细胞增殖中起着重要作用。本实验旨在研究他莫昔芬及携带p53基因片段的重组腺病毒转染后，瘢痕疙瘩的成纤维细胞p53表达变化及对细胞生长的影响，并探索其机制。 [目的]分离并培养6例患者的瘢痕疙瘩成纤维细胞，取培养6代的细胞进行实验。①构建p53腺病毒载体系统。②检测他莫昔芬和携带p53基因片段的重组腺病毒转染单独应用及联合应用后，瘢痕疙瘩成纤维细胞P53蛋白和p53基因表达的改变及其变化规律，以及相应的细胞周期变化。③观察瘢痕疙瘩成纤维细胞P53蛋白和p53基因表达的改变与细胞周期变化之间的对应关系。④观察联合应用他莫昔芬和携带p53基因片段的重组腺病毒转染对细胞生长的抑制是否具有协同作用。 [方法]①构建腺病毒载体系统并转染瘢痕疙瘩成纤维细胞。②瘢痕疙瘩成纤维细胞分为四组，他莫昔芬和携带p53基因片段的重组腺病毒转染单独及联合应用后，分别应用RT—PCR以及Western Blot方法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞P53蛋白和p53基因表达的变化，以单纯瘢痕疙瘩成纤维细胞做对照。③流式细胞仪检测各组细胞细胞周期的变化。 [结果]①成功的构建了腺病毒载体系统，能够高效率转染瘢痕疙瘩成纤维细胞。②他莫昔芬和携带p53基因片段的重组腺病毒转染作用后3天内，瘢痕疙瘩成纤第二军医大学中文摘要博士学位论文维细胞P53蛋白和p53基因表达与对照组相比显著增加。与此相对应，细胞生长明显抑制，大量瘫痕疙瘩成纤维细胞停滞于G。、G，期。③他莫昔芬和携带p53基因片段的重组腺病毒转染的联合应用后，对瘫痕疙瘩成纤维细胞P53蛋白和P53基因表达和细胞周期的抑制程度明显优于他莫昔芬或携带p53基因片段的重组腺病毒转染的单独作用。〔结论〕他莫昔芬和携带p53基因片段的重组腺病毒转染均可使瘫痕疙瘩成纤维细胞的P53蛋白和p53基因表达显著增加，导致瘫痕疙瘩成纤维细胞生长抑制，使细胞大量停滞于G。、G，期。他莫昔芬和携带p53基因片段的重组腺病毒转染的联合应用效果要明显优于他莫昔芬和携带p53基因片段的重组腺病毒转染的单独应用。