论文部分内容阅读
目的:探讨EGFR核心岩藻糖基化在肾间质纤维化(renal interstitial fibr osis RIF)中的作用方法:选取2015年在大连医科大学附属第一医院肾内科住院并接受肾脏活检的原发性肾小球疾病患者24例,排除各种继发性肾小球疾病,根据RIF评分分为4组,分别为无病变组、轻度组、中度组、重度组。对照组患者共6例,取自泌尿外科因外伤、肿瘤等原因行手术治疗所留取的肾组织标本,为正常组。对5组患者肾组织标本行免疫组化技术检测α-1,6核心岩藻糖基转移酶(α1,6-fucosyltra nsferase 8,FUT-8)的表达变化,分析RIF和FUT-8表达的相关性。为验证临床患者RIF和FUT8表达的相关性,探讨其作用机制,通过给予Wis tar大鼠尾静脉注射FUT8ShRNA重组腺病毒抑制FUT8基因的表达,建立RUUO模型。50只SD大鼠随机分为10组。(1)N组,正常组;(2)SHAM组,假手术组;(3)SHAM+GFP组,假手术加空载体组;(4)UUO3d组,UUO术后3d处死;(5)RU UO7d组,UUO术后3d解除梗阻,梗阻解除后7d处死;(6)RUUO7d+Fut8ShRNA组,UUO术后3d解除梗阻,经大鼠尾静脉注入适量重组腺病毒,梗阻解除后7d处死;(7)RUUO14d组;(8)RUUO14d+Fut8ShRNA组;(9)RUUO28d组;(10)RUUO28d+F ut8ShRNA。评价指标:1)肾组织行PAS染色,观察肾小管及间质的变化;2)免疫组化观察α-SMA、E-cadherin的表达变化;3)免疫荧光检测FUT8的表达变化;4)RT-PCR检测FUT8、α-SMA、E-cadherin的mRNA表达变化;5)western blot检测EGFR糖链及EGFR/ERK/JNK各通路蛋白的表达变化。结果:5组患者在一般情况年龄、性别、甘油三酯、胆固醇、血钙、血磷、血尿素氮差异无统计学意义(P>0.05);血肌酐水平重度组较其它组增高(P<0.05),24h尿蛋白水平无病变组、轻度组、中度组、重度组均高于正常组(P<0.05)。Sp earman相关性分析显示FUT8的表达与肾间质纤维化呈正相关(r=0.696,P<0.05);免疫组化显示FUT8在UUO3d组表达升高,FUT8ShRNA(+)组较FUT8ShRNA(-)组FUT8表达降低,RT-PCR及western blot分别从mRNA及蛋白质水平验证了FUT8ShRNA(+)组较FUT8ShRNA(-)组FUT8表达降低。PAS染色结果显示UUO3d组肾小管扩张,出现空泡样变,肾间质炎细胞浸润,随着梗阻的解除,肾小管逐渐恢复至接近正常,炎细胞浸润减轻,其中FUT8ShRNA(+)组较FUT8ShRNA(-)组减轻。免疫组化结果显示UUO3d组α-SMA表达升高,随着梗阻的解除,逐渐恢复至接近正常水平,其中FUT8ShRNA(+)组较FUT8ShRNA(-)组表达降低,RT-PCR及wes tern blot与此结果一致;UUO3d组E-cadherin表达降低,随着梗阻的解除,逐渐恢复,其中FUT8ShRNA(+)组较FUT8ShRNA(-)组表达升高,RT-PCR及weste rn blot与此结果一致;Western Blot检测EGFR通路总蛋白EGFR、ERK、JNK在U UO3d组表达增高,梗阻缓解7d、14d、28d表达逐渐降低,其中FUT8ShRNA(+)组与FUT8ShRNA(-)无差异;p-EGFR、p-ERK、p-JNK在UUO3d组表达增高,梗阻缓解7d、14d、28d表达逐渐降低,其中FUT8ShRNA(+)组较FUT8ShRNA(-)表达降低。结论:Fut8的表达随着RIF的加重而增加,抑制FUT8表达可以抑制EGFR/E RK/JNK通路蛋白磷酸化所致的RIF。