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背景：在高血压和心肌缺血等疾病中,肾素-血管紧张素系统(RAS)激活是其重要特征,RAS激活后合成和释放Ang Ⅱ能够诱发一系列生理病理过程,病理过程积累最终可以导致心衰。在心脏中Ang Ⅱ可以通过提高NAD(P)H氧化酶的产生而增加ROS的产生,诱导心肌肥厚和调节心脏成纤维细胞的增殖及胶原代谢,导致心脏重构。心肌纤维化是心脏重构的主要病理变化之一,主要表现为大量细胞外基质蛋白在细胞外问隙沉积和心肌成纤维细胞的过度增殖。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)是生物催化反应必不可少的辅酶,它在很多转录过程中发挥着关键的调节作用。NAD依赖的去乙酰化酶Sirtl在NAD的参与下能够调节组蛋白的乙酰化状态,在增强心脏对氧化应激的耐受,调节能量代谢及抗老化等方面起着重要的作用。本实验就是考虑通过NAD增加细胞内NAD/NADH的比值,提高Sirtl等脱乙酰化酶的表达而促进抗氧化酶如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶等的活性,降低Ang Ⅱ引起的细胞内升高的ROS水平,从而抑制心肌成纤维细胞的增殖和胶原的合成与沉积,起到抑制心肌纤维化病理过程的作用。目的：(1)探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的大鼠心肌成纤维细胞胶原纤维mRNA表达的作用及可能机制。(2)探讨烟酰胺腺喋呤二核：苷酸(NAD)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的大鼠心肌成纤维乡细胞增殖的影响。方法：提取并培养新生Wistar大鼠原代心肌成纤维细胞(CFs),实验采用2-4代,以Ang Ⅱ (0.01μ mol/L,0.1μ mol/L,1μ mol/L)刺激24小时,提取总RNA检测不同浓度Ang Ⅱ对CFs的作用,选择合适浓度Ang Ⅱ的进行下一步实验。在六孔板中培养细胞,生长到合适密度后饥饿细胞24小时,采用250μ mol/LNAD预处理后,用终浓度1u mol/L Ang Ⅱ作用于心肌成纤维细胞24小时,提取总RNA。用Sirtl一siRNA(?)(?)处理细胞将SirtⅠ基因沉默后,再用(?)250μ mol/L NAD和终浓度1μ mol/L Ang Ⅱ作用于心肌成纤维细胞24小时,提取总RNA.Real timeRT-PCR法分别检测Ⅱ型胶原、Ⅲ型胶原、MMI-1、Sirtl、TGF-β1、NF-κ B等各个指标的mRNA表达。继续培养细胞,250μ mol/L NAD和终浓度1μ mol/L AngⅡ作用于心肌成纤维细胞48小时后,用Edu法检测心肌成纤维细胞增殖变化。结果：(1)CFs细胞Ⅰ型胶原的(?)mRNA随Ang Ⅱ浓度增加而表达明显增加(P<0.05),表现为对AngⅡ的浓度依赖性；(2)NAD预处理后,AngⅡ刺激Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达与Ang Ⅱ组相比较明显减少(P<0.05);与对照比较,NAD作用组collager Ⅰ和collagen ⅢmRNA表达无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05):Sirtl-siRNA转染预处理24小时后,与FAM组比较,Sirtl-siRNA组Ⅰ型胶原mRNA(?)(?)表达明显增加(P<0.01),与FAM+Ang Ⅱ组比较,Sirtl-siRNA+Ang Ⅱ组Ⅰ型胶原mRNA(?)(?)表达明显增加(P<0.01);与Sirtl-siRNA+Ang Ⅱ组比较,Sirtl-siRNA+AngⅡ+NAD组Ⅰ型胶原mRNA的表达减少(P<0.05)(3)Ang Ⅱ作用后,与对照组比较MMP-1mRNA表达明显减少(P<0.05),NAD组MMP-1mRNA表达也明显减少(P<0.05),而NAd+aNG Ⅱ作用组MMp-1mRNA的表达与Ang Ⅱ组比较表达无明显变化(P>0.05)；(4)NAD作用后与对照组比较,Sirtl mRNA表达增加(P<0.05)：SirT-siRNA转染预处理24小时后,各组SirtlmRNA表达较对照组明显减少(P<0.05);(5)对照组比较,NAD组NF-κ B mRNA的表达无明显变化(P>0.05)；angⅡ组NF-κ B mRNA的表达明显增高(P<0.01);NAD+Ang Ⅱ组NF-κB的mRNA表达量与AngⅡ组相比较明显减少(P<0.05);Sirtl-siRNA转染预处理24小时后,与FAM组比较,转染后各组NF-κ BmRNA (?)表达明显增高(P<0.05);而Sirtl-siRNA+Ang Ⅱ组与Sirtl-siRNA+Ang Ⅱ+NAD组比较,NF-κ B mRNA的表达较表达无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05);(6)对照组增殖率(单位100%)30.8±1.7比较,Ang Ⅱ处理细胞后心肌成纤维细胞的增殖率42.7±1.1,NAD+Ang Ⅱ共同处理细胞后,相对于Ang Ⅱ组,心肌成纤维细胞的增殖减少,增殖率35.1±1.4(P<0.05)。Sirtl-siRNA转染预处理24小时后,各组变化趋辨与转染前无明显变化,增殖率分别为对照组35.9±2.1,Sirt1-siRNA+AngⅡ组47.1±1.9,Sirtl-siRNA+Ang Ⅱ+NAD组38.9±2.4；(7)NAD处理细胞后与对照组比较,TGF-β1mRNA表达明显减少(P<0.05),Ang Ⅱ组TGF-β1mRNA(?)勺表达明显增多(P<0.01),NAD+Ang Ⅱ组与Ang Ⅱ组比较TGF-β1mRNA表达明显减少(P<0.01);Sirtl-siRNA转染预处理24小时后,Sirtl-siRNA+Ang Ⅱ+NAD组与Sirtl-siRNA+Ang Ⅱ组相比较,TGF-β1mRNA的表达减少(P<0.05)。结论：(1)NAD可在一定程度上通过Sirtl抑制Ang Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞I、Ⅲ型胶原mRNA的表达,能够减少胶原物质的合成和沉积；(2)NAD可以抑制Ang Ⅱ引起的大鼠心肌成纤维细胞的增殖作用,其作用机制可能与减少TGF-β1表达有关。