论文部分内容阅读
目的:前列腺癌是严重危害男性生命的恶性肿瘤之一,近年来其发病率有逐年上升的趋势。前列腺癌的病因尚不明确,可能与遗传、性激素、种族、食物、环境等因素有关。目前研究发现,某些特殊功能的基因在前列腺癌的发病、进展及转移中起着重要作用。Livin是最新发现的细胞凋亡抑制因子家族IAP的新成员,通过抑制细胞凋亡在肿瘤细胞的发生发展过程中起着重要作用。Livin的高表达与人类肿瘤的发生发展,预后不良,侵袭能力增加,减弱化疗药物敏感性及缩短患者存活时间等方面密切相关。索坦(苹果酸舒尼替尼Sunitinib malate)作为口服小分子多靶点酪氨酸激酶受体抑制剂,具有中止向肿瘤细胞供应血液的血管形成和直接攻击肿瘤细胞两种作用机制。其对于VEGF和PDGF的双重抑制效应为医治去势难治性前列腺癌(castration resistant prostate cancer)提供了重要的治疗策略。RNA干扰(RNA interference, RNAi)指的是在进化过程中由高度保守的、双链RNA (double-stranded RNA, dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的一种现象;是基因转录后沉默的方式之一。本实验应用RNA干扰技术使前列腺癌细胞中Livin基因表达沉默,观察敲除Livin基因后对前列腺癌细胞存活情况及靶向治疗药物索坦敏感性的影响。方法:1.根据Livin基因的mRNA序列设计干扰靶序列并构建其真核表达载体。2.利用脂质体将构建的pSIREN-RetroQ-Livin干扰质粒转染至人前列腺癌细胞系PC-3中,以转染空质粒pSIREN-RetroQ做对照;应用Western blot检测转染前后蛋白水平的表达,通过MTT法反映转染前后细胞存活情况的变化。3.应用MTT法检测药物索坦(苹果酸舒尼替尼Sunitinib malate)单独作用于前列腺癌细胞系PC-3时细胞的存活情况;应用MTT法检测转染Livin干扰质粒组PC-3细胞中加入索坦时细胞存活情况的变化;计算靶向治疗药物索坦的IC50.结果:1.经限制性内切酶酶切和DNA测序结果表明,成功构建pSIREN-RetroQ-Livin干扰质粒。2.Western blot结果表明Livin在前列腺癌细胞系PC-3中表达;转染pSIREN-RetroQ-Livin干扰质粒后可有效地抑制PC-3细胞中Livin的表达。MTT结果表明转染干扰质粒pSIREN-RetroQ-Livin组PC-3细胞的体外增值被显著抑制。3.MTT结果表明前列腺癌细胞系PC-3中加入索坦后其存活受到抑制;索坦与转染干扰质粒联合作用于前列腺癌细胞PC-3时,细胞存活率相对于单独加入索坦及转染空质粒组显著降低。通过MTT检测并计算IC50结果表明转染干扰质粒组相对于其他处理组索坦的半抑制率明显降低。结论:Livin基因表达沉默可以抑制前列腺癌细胞的增值并提高前列腺癌细胞对于靶向治疗药物索坦的敏感性。