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目的:研究沙鼠脑缺血再灌注后脑内tgf-β1和caspase-3蛋白表达的变化、二者的相互关系及西比灵与阿司匹林对二者表达变化的影响。
方法:采用夹闭双侧颈总动脉的方法制作沙鼠脑缺血再灌注模型;70只沙鼠随机分为正常组、假手术组、缺血再灌注组、西比灵治疗组和阿司匹林治疗组;西比灵治疗组在实验前1天喂食西比灵(按20mg/kg.d)阿司匹林治疗组在试验前5天开始喂食阿司匹林(按10mg/kg.d); 分别在缺血再灌注6小时、1天、3天和7天的各时间点处死动物,提取前脑组织,用免疫组织化学方法检测各组沙鼠脑内tgf-β1和caspase-3的表达情况;用spss进行统计分析。
结果:
1、沙鼠脑缺血十分钟再灌注6h、1d、3d、7d时,脑组织石蜡切片he染色光镜观察,随缺血时间点增加,神经元变性,坏死加重,神经胶质细胞增生明显。相同时间点相比,西比灵干预组和阿司匹林干预组脑组织损伤程度均低于缺血再灌注组。
2、免疫组化检测各组沙鼠脑组织中均可见tgf-β1蛋白阳性表达,阳性信号主要位于神经元和胶质细胞的胞浆中。正常对照组及假手术组呈弱阳性表达,两组之间比较无显著差异(p>0.05),缺血十分钟再灌注6h、1d、3d、7d后沙鼠脑组织中呈阳性或强阳性表达,与正常组及假手术组比较有显著性差异(p<0.01)。在3d时tgf-β1蛋白的表达达高峰。
3、免疫组化检测正常对照组及假手术组沙鼠脑组织中可见caspase-3蛋白在个别神经细胞及神经胶质细胞中呈阳性表达,阳性信号强弱不一,主要位于神经原和胶质细胞的胞浆中,胞核中也有表达,两组比较无显著差异(P>0.05),缺血10分钟再灌注6h、1d、3d、7d后沙鼠脑组织中呈阳性或强阳性表达,主要位于大脑皮质和纹状体及海马等处的神经细胞及胶质细胞中,与正常对照组及假手术组比较有显著性差异(P<0.01)。1d和3d时是caspase-3蛋白表达的高峰。
4、免疫组化检测西比灵干预组在缺血十分钟再灌注后6h、1d、3d、7d时,沙鼠脑组织中TGF-β1的表达趋势同缺血再灌注组,但阳性率低于缺血再灌注组,相同时间点比较有显著差异,而caspase-3表达神经细胞和胶质细胞的阳性率高峰期后移,且阳性率低于缺血再灌注组,相同时间点比较有显著差异(P<0.05)。
5、免疫组化检测阿司匹林干预组在缺血十分钟后再灌注6h、1d、3d、7d各时间点时,沙鼠脑组织中caspase-3和TGF-β1的表达趋势同缺血再灌注组,但阳性率均低于缺血再灌注组,相同时间点比较有显著差异(P<0.05)。
6.直线相关分析分析缺血再灌注组中TGF-β1蛋白与caspase-3蛋白在缺血再灌注后表达的相关性,其pearson相关系数为0.923(P<0.05、),表明在脑缺血再灌注后TGF-β1蛋白与caspase-3蛋白的表达存在正相关关系。
结论:
1、沙鼠脑缺血再灌注后,各时间点时脑内神经元和神经胶质细胞TGF-β1和caspase-3蛋白表达上调。西比灵或阿斯匹林干预后,两者表达下调。
2.在脑缺血再灌注损伤过程中,caspase-3的活化可能促进TGF-β1的表达,而TGF-B1的表达可能抑制caspase-3NN4L。