金黄色葡萄球菌是引起人畜机会性感染的一类重要病原体。它在环境中以及人体皮肤和粘膜表面都普遍存在,能引发多种高发病率和高死亡率的感染性疾病,严重危害人类健康。对金黄色葡萄球菌的分子遗传学研究能解析其毒性,致病性与耐药性相关的分子机理,有助于发现针对其感染性疾病的新的药物靶点和治疗手段。但金黄色葡萄球菌中现有的研究特定基因功能的遗传学操作技术都存在效率低、过程繁琐等问题,而且一直缺乏一种简便高效的基因敲低技术。本课题中我们基于RNA介导的DNA结合蛋白dCas9构建了一套简单高效的金黄色葡萄球菌基因敲低系统CRISPRi,通过共表达dCas9和一段引导RNA (sgRNA)就可以实现对目标基因的特异性敲低。而利用ATc诱导的启动子控制dcas9基因的表达使得该系统对基因的敲低具有可诱导性。同时我们采用了一种特殊的克隆sgRNA表达框的方法,使得敲低质粒的构建十分简便。利用CRISPRi系统,我们实现了对金黄色葡萄球菌不同菌株中不同大小不同表达水平基因的成功敲低,并证实该系统也能有效地用于必需基因的功能研究。同时,我们发现该系统也能用于对操纵子中全部或部分基因的选择性敲低。此外,通过同时表达多个sgRNA,该系统叮实现多个基因的同时敲低以及单个基因的多重敲低。最后我们也探究了利用RNA介导的核酸内切酶Cas9进行金黄色葡萄球菌基因组编辑的可行性,发现因为细菌自身DNA修复系统的低效导致Cas9并不适合用于金黄色葡萄球菌的基因组编辑。CRISPRi系统能同时用于必需和非必需基因功能的研究,相比金黄色葡萄球菌中已有的基因操作技术在构建和效率上都有着巨大的优势。这个简单、快速、经济的选择性基因敲低技术为金黄色葡萄球菌的基因功能研究提供了一种高效的工具,也将促进对金黄色葡萄球菌及其感染性疾病的认识与防治。