论文部分内容阅读
目的：观察自噬在褪黑素诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡中的作用，并对其机制进行初步探讨。方法：以含不同浓度褪黑素的培养液培养HepG2细胞，采用MTT法测定褪黑素对HepG2细胞的增殖抑制作用，应用MDC染色、流式细胞术观察给药后自噬和凋亡的发生，并通过western blot法检测自噬相关蛋白Beclinl、LC3的表达水平,评价褪黑素诱导HepG2细胞自噬的能力，同时检测Bax、Bcl-2蛋白表达变化，发现褪黑素诱导HepG2细胞凋亡相关机制；在给予褪黑素的同时应用自噬特异性抑制剂3-MA对细胞自噬进行抑制，利用MTT法和流式细胞术检测细胞活力与凋亡情况，并采用western blot法检测LC3、Bax和Bcl-2蛋白表达变化。结果：褪黑素对HepG2细胞生长有显著的抑制作用，且此作用呈明显的时间、剂量依赖性；MDC荧光染色和流式细胞术显示褪黑素给药后可诱导HepG2细胞发生自噬和凋亡，24h自噬和凋亡同时存在，自噬特异性蛋白Beclin1和LC3被激活；凋亡相关蛋白Bax表达增多、Bcl-2表达减少，Bax/Bcl-2比值与褪黑素浓度呈正相关。用3-MA抑制自噬后，HepG2细胞生长受抑、凋亡增加现象较褪黑素单独作用组明显增加，并可下调LC3蛋白表达，同时上调Bax/Bcl-2比值。结论：褪黑素能明显抑制肝癌HepG2细胞的生长，并诱导其发生自噬和凋亡。在褪黑素诱导的HepG2细胞死亡中，自噬激活能降低褪黑素对HepG2细胞的毒性，通过3-MA阻断褪黑素诱导的细胞自噬作用可显著增强褪黑素对HepG2细胞的生长抑制和凋亡促进作用。