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固有免疫在机体防御机制中具有重要作用,是抵抗病原微生物感染的第一道防线。TLRs(Toll-likereceptors)/NF-κB信号通路在固有免疫调控中起着非常重要的作用,并在机体内受到精细的调控。长链非编码RNA(longnon-codingRNA,lncRNA)作为目前研究的热点,在发育、分化和代谢等多个生物学过程发挥重要的调控作用。然而在固有免疫调控中的研究处于初步阶段。本课题旨在研究依赖TLR4/NF-KB信号通路的lncRNA,并探究转录调控机制及其在固有免疫中的功能。我们鉴定了一条依赖TLR4/NF-KB信号通路的lncRNA-FIRRE(functional intergenic repeating RNA element),并对FIRRE进行了深入研究,分析了其转录机制及在固有免疫中的作用机理。研究结果总结如下:1、筛选到了依赖于TLR4/NF-κB信号通路的lncRNA。我们使用LPS诱导物及NF-κB通路抑制剂处理人巨噬细胞U937和肠上皮细胞SW480,筛选到了依赖于TLR4/NF-κB的lncRNA-FIRRE。2、对FIRRE的转录调控机制做了深入研究。通过染色体免疫共沉淀(ChromatinImmunoprecipitation,ChIP)和荧光素酶报告基因方法,发现转录因子p65与FIRRE启动子上预测的NF-1κB结合位点(-1720)相结合,并能够诱导FIRRE的转录激活。3、FIRRE可以引起诸多免疫相关因子表达改变。通过敲低和过表达实验,发现FIRRE能正调控IL12p40(interleukin-12 p40)和VCAM1(vascular cell adhesion molecule 1)的表达,负调控IL6(interleukin-6)的表达。4、阐明了FIRRE调控相关免疫因子的机制。研究表明,FIRRE与核不均匀一核糖核蛋白U(heterogeneousnuclearribonucleoproteinU,hnRNPU)相互作用,且hnRNPU可以由TLR刺激诱导,并通过稳定mRNA正向调节某些基因的表达。我们也通过RNA结合蛋白免疫沉淀技术证实了 FIRRE和hnRNPU在人巨噬细胞和肠上皮细胞中的相互作用。具体机制上来说,FIRRE与hnRNPU相互作用,在LPS诱导下,通过靶向炎症因子VCAM1和IL12p40 3’UTR上的AU的富含元件(ARE位点),来调节炎症基因的mRNA的稳定性,从而调节基因的表达。5、在对FIRRE同源性分析中,我们发现FIRRE在小鼠中也具有相似的功能和机制。综述所述,我们的研究发现,FIRRE作为NF-κB依赖性lncRNA,在固有免疫的炎症基因的转录后调控中具有新的调节作用。此项研究阐明了一条新的lncRNA,参与机体固有免疫的调控机理,将可能为抗病原生物治疗提供一条新的治疗方案。