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目的阐明PLA2G16基因的表达与人骨肉瘤发生发展的相关性,明确PLA2G16磷脂酶在调节骨肉瘤转移与恶化过程中的作用机理;探索PLA2G16作为骨肉瘤临床治疗标志物的潜在价值,为确立PLA2G16作为骨肉瘤诊断与治疗的新靶点提供依据。方法1)逆转录病毒或慢病毒包装系统建立PLA2G16稳定高表达或敲低的骨肉瘤细胞系,利用这些细胞系分析PLA2G16的高表达或敲低表达分别对细胞增殖(MTT assay)、迁移(Wound-healing assay)、侵润(Matrigel Transwell assay)、克隆形成(Colony Formation)、极性依赖性生长(Soft agar assay)和药物敏感性的影响。同时对PLA2G16基因进行C113S突变使其失去磷脂酶活性,检测PLA2G16-C113S对骨肉瘤细胞表型的影响。2)利用qRT-PCR及Western bot等技术探索PLA2G16促进骨肉瘤发展转移的作用机制。使用小分子抑制剂分别抑制PLA2G16的磷脂酶活性及其靶蛋白的表达进一步证实PLA2G16是通过发挥磷脂酶活性而作用其靶蛋白,进而影响骨肉瘤的发展转移。3)将PLA2G16稳定高表达的细胞株通过皮下注射种入裸鼠进行动物实验,观察PLA2G16对其成瘤率的影响,并通过Western blot等检测PLA2G16及其下游蛋白的表达。4)采用组织芯片和免疫组化技术,检测骨肉瘤组织中PLA2G16及其靶蛋白的表达;收集骨肉瘤患者的临床资料分析PLA2G16及其调控的下游蛋白与骨肉瘤发生与发展的相关性。结果1)PLA2G16磷脂酶的表达促进了骨肉瘤的增殖,克隆形成能力,极性依赖性生长,侵袭与迁移。2)骨肉瘤细胞中PLA2G16的表达降低了其对传统化疗药物的敏感性,且这种作用具有时间和剂量累加效应。2)PLA2G16的癌基因功能与其细胞核内表达相关并通过活化MAPK通路促进其发展转移。3)PLA2G16的表达促进裸鼠的成瘤。4)PLA2G16通过促进ERK1/2的磷酸化降低了骨肉瘤患者生存率。结论1)PLA2G16作为一种癌基因,通过活化MAPK通路促进了骨肉瘤的发展转移。2)PLA2G16可被确立为骨肉瘤诊断治疗的靶点。