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现在社会环境污染、化学污染以及食品中微生物的污染时刻威胁着人类身体健康,甚至会致癌。开发出灵敏的检测生物分子如DNA和癌症生物标志物以及食品中微量污染物的方法在生物医学研究、临床诊断以及食品安全检测方面都是迫在眉睫的。本文基于DNA酶和磁性分离技术利用化学发光法(Chemiluminescenc,CL)检测食品污染物三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate, ATP)、癌症生物标志物Dam甲基转移酶(Methyltransferase,MTase)以及核酸酶EcoRV。
(1)基于适配体的酶切辅助化学发光法检测ATP
利用磁性分离技术,结合核酸外切酶降解ATP适配体的功能开发一种化学发光法来检测ATP。经过对实验条件的优化,ATP标准品的浓度与化学发光信号值之间建立了标准曲线(R2=0.9905),并且得到了较低的检测限0.032μmol/L。最后又通过对ATP类似物的考察,表明了该方法具有良好的特异性和选择性。
(2)HRP诱导的化学发光检测DamMTase活性
建立了一种基于HRP诱导的化学发光方法,该方法结合生物素-链霉亲和素特异性相互作用,磁分离技术以及DNA链取代来检测DamMTase活性。生物素和链霉亲和素之间的高特异性结合将辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase, HRP)联接在引物探针上,从而增强了实验的特异性和稳定性。同时,利用磁分离技术降低了实验过程中的非特异性干扰。DamMTase浓度与化学发光信号值呈现了良好的线性关系(R2=0.9940)且得到较低的检测限0.0082U/mL。该策略可以有效地用于筛选DNAMTase抑制剂,也可用于测定复杂生物样品中的DamMTase。
(3)基于生物传感器的双重化学发光信号比检测核酸酶EcoRV
利用羧基磁性微球作为载体,通过DNA链置换构建了双生物传感器,基于双信号比率的策略灵敏的检测核酸酶EcoRV。该酶能够裂解包含特定短回文序列的双链DNA,产生的部分DNA片段可与微球表面的两种捕获探针基于链竞争而互补联接,从而构建了两种生物传感器,最终得到一负一正两种化学发光信号。在0.01~10U/mL的浓度范围内,双化学发光信号的比值同EcoRV浓度的对数值呈良好的线性关系,相关系数R2=0.9942,检测限为0.0045U/mL。该策略具有良好的选择性,且可以实现人血清中的EcoRV的检测。
(1)基于适配体的酶切辅助化学发光法检测ATP
利用磁性分离技术,结合核酸外切酶降解ATP适配体的功能开发一种化学发光法来检测ATP。经过对实验条件的优化,ATP标准品的浓度与化学发光信号值之间建立了标准曲线(R2=0.9905),并且得到了较低的检测限0.032μmol/L。最后又通过对ATP类似物的考察,表明了该方法具有良好的特异性和选择性。
(2)HRP诱导的化学发光检测DamMTase活性
建立了一种基于HRP诱导的化学发光方法,该方法结合生物素-链霉亲和素特异性相互作用,磁分离技术以及DNA链取代来检测DamMTase活性。生物素和链霉亲和素之间的高特异性结合将辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase, HRP)联接在引物探针上,从而增强了实验的特异性和稳定性。同时,利用磁分离技术降低了实验过程中的非特异性干扰。DamMTase浓度与化学发光信号值呈现了良好的线性关系(R2=0.9940)且得到较低的检测限0.0082U/mL。该策略可以有效地用于筛选DNAMTase抑制剂,也可用于测定复杂生物样品中的DamMTase。
(3)基于生物传感器的双重化学发光信号比检测核酸酶EcoRV
利用羧基磁性微球作为载体,通过DNA链置换构建了双生物传感器,基于双信号比率的策略灵敏的检测核酸酶EcoRV。该酶能够裂解包含特定短回文序列的双链DNA,产生的部分DNA片段可与微球表面的两种捕获探针基于链竞争而互补联接,从而构建了两种生物传感器,最终得到一负一正两种化学发光信号。在0.01~10U/mL的浓度范围内,双化学发光信号的比值同EcoRV浓度的对数值呈良好的线性关系,相关系数R2=0.9942,检测限为0.0045U/mL。该策略具有良好的选择性,且可以实现人血清中的EcoRV的检测。