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为探索LGALS1对猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在Marc-145中感染增殖的作用,本研究通过LGALS1抗体阻断和siRNA法,检测PRRSV在Marc-145中的增殖、基因表达水平及感染滴度,为阐明PRRSV感染机制奠定理论基础。 将前期纯化的LGALS1蛋白乳化后免疫家兔并收集免疫血清,ELISA检测抗体效价并通过Western blot检测蛋白表达情况;设置LGALS1和PRRSV共同孵育Marc-145细胞的试验组以及PRRSV孵育Marc-145细胞的对照组,通过间接免疫荧光试验、TCID50测定和实时荧光定量PCR来分析PRRSV感染增殖情况;同时设计LGALS1siRNA分子,转染Marc-145细胞后利用实时荧光定量PCR检测干扰效果,设置有效siRNA分子转染Marc-145细胞后再接种PRRSV的试验组以及无效siRNA分子转染Marc-145细胞后再接种PRRSV的对照组,同样利用间接免疫荧光试验、TCID50测定和实时荧光定量PCR来分析PRRSV感染增殖情况。 结果发现免疫血清中的抗体效价可高达1∶10000,Western blot检测到了预期大小的蛋白条带;但抗LGALS1血清组与对照组24h和48h的TCID50及病毒mRNA含量差异均不显著,抗LGALS1血清组与病毒液对照组在24h和48h的荧光无明显差异。转染siRNA质粒组LGALS1mRNA表达水平显著低于对照组,表明siRNA可抑制LGALS1的转录;但转染质粒组与对照组孵育PRRSV后24h和48h的TCID50及病毒mRNA含量差异均不显著,转染siRNA质粒接毒培养24h和48h,与对照组荧光无明显差异。 这些结果说明抗LGALS1血清在PRRSV对Marc-145感染增殖中无作用,LGALS1siRNA在PRRSV对Marc-145感染增殖中无作用。