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目的：1．通过对一种新的CD44变异体(CD44v17)基因表达量的检测，了解其在食管及胃癌组织中的表达情况，探讨其表达与食管癌肿瘤大小、发生部位、病理类型、分化程度、TNM分期、淋巴结转移，胃癌的肿瘤大小、组织学分类、浸润深度、有无淋巴结转移、有无肝脏转移的关系。2．通过对CD44v17和MDR1基因表达量的检测，了解CD44v17和MDR．1基因在食管及胃癌组织中表达水平的相关性及其临床意义。
方法：1．从MCF—7/Adr细胞中提取总RNA进行RT—PCR，获得全长cDNA模板，根据本实验室在MCF—7/Adr中新发现的一种CD44剪切拼接变异体CD44v17(Gene Bank NO．FJ216964)和MDR1基因设计特异性荧光定量PCR引物，从而获得CD44 v17和MDR1基因产物，PCR产物于2％琼脂糖凝胶电泳后切胶回收，并参照胶回收试剂盒说明书对PCR产物进行回收，纯化。2．将PCR纯化产物连接于pMD19—T simplevector上，TA克隆后，提取质粒并测定含量及进行双酶切反应验证，将阳性质粒进行DNA测序。3．将含有目的基因的阳性质粒用EppendofBio—photometer测定浓度，按公式：C×10—8/(R+3000)×3．415×6．02×1023(copies/μl)计算质粒拷贝数，稀释成108～1045个梯度浓度的标准品。4．应用SYBR GreenⅠ荧光染料，采用real time PCR法检测73例食管癌及87例胃癌组织及相应癌旁组织CD44v17 mRNA、MDR1 mRNA的表达，根据标准曲线计算出CD44v17 mRNA、MDR1 mRNA的表达量，分析CD44v17的表达与食管及胃癌临床参数的关系，并探讨其与MDR1基因表达的相关性。
结果：1．食管癌组织CD44v17 mRNA表达明显高于相应癌旁正常组织(P<0．05)；食管癌CD44v17 mRNA表达与肿瘤的大小，发生部位，病理类型均无相关性(P>0．05)；而与食管癌的分化程度，临床TNM分期，淋巴结转移相关(P<0．05)。2．胃癌组织CD44v17 mRNA表达明显高于相应癌旁正常组织(P<0．05)；胃癌肿瘤>5cm组CD44v17mRNA表达与胃癌肿瘤≤5cm组表达无统计学意义(P>0．05)；未分化腺癌组CD44v17 mRNA表达明显高于乳头状腺癌及管状腺癌组(P<0．05)，乳头状腺癌组CD44v17 mRNA表达与管状腺癌组无统计学意义(P>0．05)；肿瘤累及浆膜及浆膜外组CD44v17 mRNA表达显著高于侵及粘膜、粘膜下层及肌层组(P<0．05)，而肿瘤侵及粘膜及粘膜下层组的CD44v17 mRNA表达与侵犯肌层组表达无统计学意义(P>0．05)。淋巴结转移组CD44v17 mRNA表达明显高于淋巴结无转移组(P<0．05)；有肝脏转移组CD44v17 mRNA表达显著高于无肝脏转移组(P<0．05)。3．食管癌组织中MDR1 mRNA表达为2．96±1．27，相应癌旁组织的表达为1．87±0．87，食管癌组织的MDR1 mRNA表达明显高于相应癌旁组织(P<0．01)。胃癌组织中MDR1 mRNA表达为2．88±1．32，相应癌旁组织的表达为1．98±0．91，胃癌组织的MDR1mRNA表达明显高于相应癌旁组织(P<0．01)。4．在食管癌组织中CD44v17与MDR1基因的表达呈正相关(r=0．8276，P<0．01)；在胃癌组织中CD44v17与MDR1基因的表达呈正相关(r=0．8322，P<0．01)。
结论：1．CD44v17 mRNA在食管及胃癌组织中高表达，可能与食管及胃癌的侵袭、转移及预后有关。2．在食管及胃癌中CD44v17的表达与MDR1的表达密切相关，两者同时高表达提示患者预后不良。