白藜芦醇对小鼠黑色素瘤RUNX3基因的作用及机制

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第一部分:白藜芦醇对小鼠黑色素瘤B16F10细胞RUNX3的影响目的:探讨RES对小鼠黑色素瘤细胞B16F10中RUNX3基因的作用及其机制。方法:小鼠黑色素瘤细胞B16F10,分为5组:对照组,低、中、高剂量RES组(20μM,40μM,80μM),阳性药物组[5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR),10μM],孵育48h后,用RT-PCR和Western-blotting分别从基因水平和蛋白表达水平反映RUNX3的变化;用MSP法分析RUNX3启动子甲基化程度。结果:1)B16F10细胞中RUNX3表达缺失,5-Aza-CdR上调B16F10细胞的RUNX3基因和蛋白表达;2)给予RES干预后,其RUNX3基因和蛋白表达较对照组均有不同程度的上调,并且呈剂量依赖;3)B16F10细胞中RUNX3启动子处于甲基化状态,给予5-Aza-CdR处理后RUNX3启动子呈去甲基化状态,RES低、中、高三个剂量均可以使RUNX3启动子甲基化程度降低,且呈剂量依赖。第二部分:白藜芦醇对C57BL小鼠荷黑色素瘤模型RUNX3的影响目的:探讨RES对C57BL小鼠荷黑色素瘤模型中RUNX3基因的作用。方法:通过对C57BL小鼠皮下注射B16F10黑色素瘤细胞,建立皮下移植瘤模型。实验动物分为4组:模型对照组(10%CMC-Na),低、高剂量RES组(50、100mg/kg/d),连续灌胃21d;阳性药物[达卡巴嗪(DTIC),40mg/kg]组,腹腔注射每三天一次,共21d。末次给药后测量肿瘤体积和肿瘤组织重量,观察药物对肿瘤组织的抑制作用;用RT-PCR法检测外周血和肿瘤组织中RUNX3mRNA的相对表达;Western-blotting法测定RUNX3蛋白的相对含量。结果:1)在C57BL移植瘤模型中,低、高剂量RES和DTIC均可使肿瘤体积缩小,分别为对照组的0.83、0.59、0.27倍,其差异均有统计学意义(P<0.05);2)DTIC对外周血和肿瘤组织RUNX3基因、蛋白表达没有影响,而RES低、高剂量可以不同程度上调外周血和肿瘤组织中RUNX3mRNA和蛋白的表达。结论:RES上调小鼠黑色素瘤B16F10细胞及荷瘤小鼠RUNX3基因表达。RES通过去甲基化作用影响RUNX3表达,可能是RES抑制黑色素瘤的机制之一。
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