菲降解生物膜与河水生物膜中的功能菌群分析

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细菌在现实生境中多以生物膜形式生存,细菌降解多环芳烃(polycyclic aromatic hydrocarbons, PAHs)受生物膜形成的影响。生物膜中的群体感应信号分子——酰基高丝氨酸内酯(acyl homoserine lactone, AHL)参与调控生物膜的形成。因此,研究生物膜中AHL产生菌和PAHs降解菌,并筛选产AHL的PAHs降解菌,能够为探索细菌通过AHL型群体感应调控PAHs降解提供前提条件。本论文采用了PCR扩增和克隆文库的方法研究了膨润土颗粒生物膜中的菲降解菌群的特性;用可培养的方法从河水生物膜形成过程中分离了AHL产生菌,分析了AHL产生菌的多样性;根据两者种属的重叠,通过对可培养方法的改进,筛选了既能产AHL又能PAHs的功能菌,主要得到以下研究结论:(1)以煅烧的有机膨润土(COB)和膨润土原土(CB)为生物膜载体,在菲降解的过程中发现COB和CB的生物膜上菌群丰富,其中鞘氨醇单胞菌科(Sphingomonadaceae)和红杆菌科(1hodobacteraceae)为丰富度最高的两个菌属。COB载体上所有降解基因和CB载体上约80%的降解基因都与鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas sp.)的PAH-RHDa基因最为相似。COB生物膜对携带此基因的功能菌具有特定的选择倾向。(2)在1-60d的淡水生物膜中检测到了AHL信号,并分离了24株AHL产生菌,包括17株气单胞菌属(Aeromonas),3株假单胞菌属(Pesudomonas),3株剑菌属(Ensifer)和1株不动杆菌属(Acinetobacter)的菌株。其中,与异常嗜糖气单胞菌(A. allosaccharophila)、简氏气单胞菌(A. jandaei)、源水气单胞菌(A. aquariorum)、帕尼帕特假单胞菌(P. panipatensis)、粘着剑菌(E.adhaerens)和谢氏不动杆菌(A. tjernbergiae)高度相似的6株分离菌是新报道的AHL产生菌,在种属水平上扩展了AHL产生菌的种类。(3)筛选了1株性能稳定的产AHL降解菌,16S rRNA分析与Sphingobium fuliginia同源性最高。考察了该菌株对菲的降解动力学,3d内降解率达98.4%。GC-MS检测其产生的AHL分子包括C12-HSL。
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