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目的:采用A549细胞株建立非小细胞肺癌体外和体内活性筛选模型,探究芦根多糖对A549细胞增殖的抑制作用并探究相关分子机制。方法:以实验室前期制备的芦根多糖为研究对象,通过建立A549细胞体外活性筛选模型、体内移植瘤小鼠模型,探究芦根多糖对A549细胞增殖的影响。(1)通过体外培养A549细胞建立非小细胞肺癌体外活性筛选模型,采用CCK-8细胞活性试剂盒检测400μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL芦根多糖以及索拉菲尼4μmol/mL作用24h、48h、72h后对A549细胞活性的影响,并采用流式细胞技术检测100μg/mL芦根多糖作用48h后对A549细胞凋亡的影响,采用qRT-PCR技术检测100μg/mL芦根多糖作用48h后对A549细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3的影响,采用westernblot技术检测100μg/mL芦根多糖作用48h后A549细胞LC-3、AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响,以此探究芦根多糖对A549细胞活性、细胞凋亡、自噬作用的影响;(2)通过对裸鼠腋下注射A549细胞建立非小细胞肺癌荷瘤小鼠模型,观察100 mg/mL芦根多糖对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响,每三天检测一次肿瘤体积,并绘制肿瘤生长曲线,实验最后一天处死小鼠并分离肿瘤块,称重记录,并结合免疫组化观察芦根多糖对荷瘤小鼠A549细胞肿瘤组织凋亡蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响。结果:(1)芦根多糖100μg/mL作用于A549细胞48h、72h均使A549细胞增殖抑制率大于30%,其余剂量也表现出抑制A549细胞增殖的作用,但作用效果比100μg/mL稍弱,结果表明100μg/mL芦根多糖对A549细胞增殖具有明显抑制作用;流式细胞技术检测结果发现:与对照组相比,100μg/mL芦根多糖、4μmol/mL索拉菲尼作用48h使A549细胞早期凋亡(Q2象限)、晚期凋亡(Q3象限)比例显著升高,细胞凋亡率(Q2、Q3象限总和)显著升高(P<0.05),提示芦根多糖具有促进A549细胞凋亡的作用;qRT-PCR结果显示,芦根多糖组中Bax、Caspase-3 mRNA表达升高(P<0.05),Bcl-2表达降低(P<0.05);蛋白表达结果发现:与对照组相比,100μg/mL芦根多糖、4μmol/mL索拉菲尼作用48h后,AKT、PI3K总蛋白表达水平无明显变化,LC-3Ⅱ/Ⅰ、p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K比值显著升高(P<0.05);Bax、Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05),Bcl-2表达降低(P<0.05)。(2)裸鼠移植A549细胞7天后,腋下开始生长肿瘤块,第13天18只小鼠肿瘤体积达到90 mm~3,模型成功率90%,随后根据小鼠肿瘤体积将小鼠分成三组,并灌胃给予100 mg/kg芦根多糖和腹腔注射2 mg/kg顺铂。给药第9天开始,顺铂组及芦根多糖组肿瘤生长曲线平缓,肿瘤体积明显低于模型组。给药第18天,处死小鼠分离肿瘤块,称重记录,与模型组相比,顺铂组和芦根多糖组小鼠肿瘤的抑制率分别为39%、36%,芦根多糖能显著抑制荷瘤小鼠A549细胞肿瘤生长(P<0.05);免疫组化结果显示给药18天后芦根多糖和顺铂组凋亡蛋白Bax、Casepes-3表达显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05),表明芦根多糖能促进A549细胞移植瘤模型小鼠肿瘤组织凋亡。结论:本研究通过课题组前期制备分离的芦根多糖对A549细胞进行干预,然后采用流式细胞技术和westernblot技术对细胞凋亡和自噬相关蛋白进行检测,并采用体内模型进行验证,结果证实芦根多糖具有抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖的作用,其作用机制可能是通过激活PI3K-AKT信号通路激活A549肿瘤细胞自噬,同时上调Bcl-2和Caspase-3蛋白,促进A549细胞凋亡,共同抑制A549细胞增殖,表明芦根多糖能通过激活自噬和促进凋亡抑制A549细胞增殖,提示芦根多糖可能作为一种潜在的治疗非小细胞肺癌的新型药物。