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肿瘤生物治疗是肿瘤治疗研究最活跃的领域。新的治疗方法不断涌现。CIK细胞治疗正在临床转化过程中。如何提高细胞治疗的特异性及其杀伤活性,仍有很大的研究空间。CIK细胞由一系列细胞因子激活,肿瘤杀伤特异性不强。肿瘤细胞疫苗是肿瘤疫苗的一种,主要由肿瘤细胞和佐剂构成。肿瘤细胞表面抗原激活免疫系统,佐剂辅助增强免疫系统的肿瘤杀伤作用,对免疫细胞的扩增刺激作用有待提高。目前比较成功的肿瘤细胞疫苗是GVAX,是表达GM-CSF的前列腺癌细胞系,已用于转移性黑色素瘤、转移性肾癌和非小细胞肺癌等肿瘤的临床试验。本研究的目的是建立及鉴定稳定表达IL-21的和IL-15的白血病细胞系,并初步检测其刺激活化淋巴细胞的能力及活化淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤功能,探讨肿瘤细胞成为肿瘤细胞疫苗的可能性。本研究首先构建携带白介素和RFP基因的质粒,包装慢病毒,感染4种白血病细胞系,连续传代后,通过荧光显微镜、流式细胞仪、PCR和ELISA法鉴定建立的8种细胞系。然后以稳定分泌白介素的白血病细胞为抗原刺激PBMC增殖,细胞分析计数仪检测增殖倍数,流式细胞仪分析淋巴细胞的表型,CCK8检测增殖后的淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。本研究建立稳定表达IL-21的4种细胞系：K562-IL-21、THP-1-IL-21、Jurkat E6-1-IL-21和RPMI8226-IL-21和稳定表达IL-15的4种细胞系：K562-IL-15、THP-1-IL-15.Jurkat E6-1-IL-15和RPMI8226-IL-15.3份人PBMC在4种分泌IL-21的白血病细胞的作用下都有增殖,增殖倍数在1.147±0.057～2.725±0.345倍之间,淋巴细胞的增殖倍数在3份人PBMC之间无显著统计学差异(P>0.01)。不同数量的工L-21分泌白血病细胞都可激活淋巴细胞增殖,增殖的倍数在1.127±0.152“2.213±0.200之间,增殖的淋巴细胞数量之间亦无显著统计学差异(P>0.01)。流式结果显示增殖后CD3+T淋巴细胞和CD56+NK细胞的比例降低(P<0.05),CD19+B淋巴细胞比例增加(P<0.05)；由分泌IL-21白血病细胞激活后的淋巴细胞对母系白血病细胞的杀伤作用明显高于对照组。由分泌IL-21白血病细胞激活后的淋巴细胞对母系白血病细胞和其他7种肿瘤细胞均有杀伤作用,杀伤率在(28.68±9.31)%～(78.45±0.61)%之间。3份PBMC在2种分泌IL-15白血病细胞的作用下都有增殖,增殖倍数在1.23±0.227～1.59±0.178倍之间,淋巴细胞的增殖倍数在3份之间无显著性差异(P>0.01)。不同数量的抗原细胞都可激活淋巴细胞增殖,增殖的倍数在1.30±0.277～1.48±0.222之间,增殖的淋巴细胞数量之间亦无显著性差异(P>0.01)。分泌IL-15的白血病细胞刺激增殖后CD3+T淋巴细胞和CD19+B淋巴细胞比例下降,CD56+NK细胞比例增加(P<0.05)。由分泌IL-15白血病细胞激活后的淋巴细胞对母系白血病细胞的杀伤作用明显高于对照组。用分泌IL-15的白血病细胞刺激增殖的淋巴细胞对母系白血病细胞和其他7种肿瘤细胞,杀伤率在(34.84±3.98)%～(78.45±0.61)%之间。本研究证明分泌IL-21的白血病细胞和分泌IL-15的白血病细胞均可刺激PBMC增殖并激活其对肿瘤细胞的杀伤作用,具有成为肿瘤疫苗的可能。