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狂犬病（Rabies）是由狂犬病病毒（Rabies virus,RABV）引起的一种人兽共患中枢神经系统传染病,至今依然对世界特别是发展中国家和地区的公共健康安全构成严重威胁。我国每年人间狂犬病发病数近1000例,然而狂犬病的发病机制至今依然不清楚,也缺乏有效的治疗手段,使得其病死率接近100%。RABV感染宿主细胞后,其病毒基因组RNA或转录前导RNA链（leader RNA）可被RIG-I所识别,从而诱导Ⅰ型干扰素途径（IFN-Ⅰ）,发挥抵抗RABV的作用。已有研究发现RABV磷蛋白可以抑制宿主的干扰素通路,通过改变磷蛋白的这种能力可以影响病毒的毒力,RABV核蛋白也可以影响干扰素的激活,通过改变核蛋白的氨基酸组成可以减弱病毒的毒力。然而,对病毒致病力起关键作用的G蛋白是否在调节IFN-Ⅰ途径中发挥着作用?其在抵抗IFN-Ⅰ的抗病毒过程中是否扮演着重要角色?这些问题都需要更多的研究。鉴于此,我们设计实验开展了本课题。我们选择了3株狂犬病毒,分别是:狂犬病病毒弱毒Hep-Flury、狂犬病病毒固定毒CVS-11毒株和以Hep-Flury为骨架替换了CVS-11的G基因所得的重组病毒HepG。分别研究在体内和体外感染Hep-Flury、HepG、CVS-11造成对Ⅰ型干扰素通路激活和调控的差异,并对比研究了携带不同G基因狂犬病强弱毒在神经细胞中复制能力的差异和对抗Ⅰ型干扰素抗病毒作用的差异性。.我们首先测定了上述3种毒株对乳鼠致病性强弱的影响,发现HepG的LD50明显比Hep-Flury高,接近于CVS-11。通过实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,qPCR）检测发现Hep-Flury感染中枢神经系统后能更早地激活IFN-Ⅰ相关基因表达,而CVS-11和HepG则在感染后第7天较强地刺激IFN-Ⅰ通路相关基因的表达,说明感染后期的激活水平远超Hep-Flury。之后,将Hep-Flury、HepG、CVS-11体外细胞感染NA细胞,同样检测IFN-Ⅰ通路相关因子的表达,发现Hep-Flury激活干扰素通路的水平总体较高,感染前期远高于HepG和CVS-11,中后期Hep-Flury缓慢回落至接近HepG和CVS-11。在体外NA细胞感染时,HepG和CVS-11在感染晚期激活IFN-Ⅰ反应的程度未像小鼠体内那样强于弱毒Hep-Flury。另外,通过对比以Hep-Flury和以其为骨架分别替换了野毒株GD-SH-01的P、M、G基因拯救出的rHep-shP、rHep-shM、rHep-shG 3株狂犬病毒。在NA细胞上感染对激活IFN-Ⅰ通路相关因子的影响发现G基因对激活干扰素有一定的调节作用,但调节和抑制的程度没有P基因的大。通过测定Hep-Flury、HepG、CVS-11在3T3细胞、NA细胞和SK细胞上的生长曲线发现,3种病毒在3T3细胞上的复制水平普遍都较低。在NA、SK细胞上,病毒的滴度整体较高。整体而言HepG和CVS-11呈现了比较相近的复制趋势,而Hep-Flury在3种细胞中的复制水平都低于HepG和CVS-11,说明携带不同G基因对病毒在细胞上的复制有影响。之后,在NA细胞和SK细胞上进行接毒前分别加入Poly（I:C）刺激神经细胞产生IFN-Ⅰ,比对研究携带不同G基因的狂犬病毒毒株对抗IFN-Ⅰ作用的能力,研究发现,Poly（I:C）处理细胞后,Hep-Flury的复制受到明显抑制,而对CVS-11及HepG复制的影响则较小。该结果暗示相对于弱毒株,致病毒株的G蛋白对于IFN-Ⅰ通路的作用有一定的抵抗能力。