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卵黄高磷蛋白(phosvitin,Pv)是卵黄蛋白原(vitellogenin,Vg)被卵母细胞吸收酶解后的主要产物之一,是一种富含磷酸化丝氨酸的具有两亲性的卵黄蛋白。研究表明,Pv具有螯合金属离子的作用、乳化性、抗氧化性、抗凝血酶活性和免疫作用等多种功能性质。本论文的目的是以鸡Pv为材料,研究其在免疫调节方面的功能。本论文第一部分对Pv的杀菌活性及机理进行研究。我们发现在50oC时Pv对革兰氏阴性菌大肠杆菌(Escherichia coli,E. coli)和革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)的生长都有很强的抑制作用,但是37oC下Pv无显著的杀菌作用。将异硫氰酸荧光素(FITC)标记的Pv与各种细菌孵育后用荧光显微镜观察发现Pv可以分别与E. coli和S. aureus结合。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)发现Pv可以特异性地结合病原相关模式分子(pathogen-associatedmolecular patterns,PAMPs)如脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)和肽聚糖(peptidoglycan,PGN),并且结合呈现浓度依赖性,表明Pv是一种多价的模式识别受体。这些结果说明和鱼类Pv一样,鸡Pv也可以与LPS、LTA和PGN等PAMPs结合,并且具有抗菌功能。然而,鸡Pv的抗菌作用具有温度依赖性。脓毒症(sepsis)是由细菌感染所引致的全身炎症反应综合征(systemicinflammatory response syndrome,SIRS),常由外伤、手术以及烧烫伤等引发,是目前重症监护(intensive care units,ICU)病人高死亡率的主要原因,全球每年因脓毒症死亡的病人高达100万以上,死忘率高达40%-60%。LPS又称内毒素(endotoxin),是脓毒症的主要诱发因子,其靶细胞为单核/巨噬细胞系统,通过一系列的信号转导引发机体释放肿瘤坏死因子α(tumer necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)、白三烯(leukotriene,TL)、一氧化氮(nitric oxide,NO)等炎性因子,启动机体过度的、自我放大和自我破坏性的炎症反应。研究发现,许多蛋白或肽类不仅具有抗菌作用,还具有免疫调节作用,可以高亲和性地结合LPS并从源头上中和其毒性,从而降低对LPS诱导的TNF-α等细胞因子的释放,降低脓毒症小鼠的死亡率,避免器官损伤。因此,在本文第一部分发现Pv可以结合LPS的基础上,我们进行了鸡Pv中和内毒素作用的研究。目前普遍认为TNF-α是LPS毒性及脓毒症症状的一个好的指示因子。因此,我们首先用LPS和Pv等处理小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,通过ELISA检测细胞上清的TNF-α的浓度来检测Pv对LPS毒性的体外中和作用。我们发现Pv与LPS共同孵育的细胞释放的TNF-α水平较LPS和生理盐水共孵育组降低(p<0.05),这表明Pv在体外具有中和内毒素的作用。MTT检测和对红细胞的溶血活性检测表明,Pv不具细胞毒性或溶血活性,因此接下来我们又进行了Pv中和内毒素作用的体内实验。作为第一步,我们建立了昆明小鼠脓毒症模型,以便研究Pv对LPS毒性的体内中和作用。通过腹腔注射不同剂量的LPS,最终选取致死率达80%-100%的50mg/kg的LPS剂量用作建立模型。在Pv对脓毒症小鼠的保护作用实验中,每组18只小鼠腹腔注射50mg/kg LPS后随即分别注射生理盐水或Pv等,发现Pv可延缓脓毒症小鼠的死亡;模型对照组在16h-24h内达到死亡高峰,死亡8只,而实验组小鼠在此时间段内仅死亡1只;10d内实验组小鼠的存活率较模型对照组有所提高,尤其在LPS注射后24h-64h期间Pv的保护作用显著(p<0.05)。另外,通过ELISA检测血清TNF-α浓度发现,Pv可以显著降低LPS诱导的小鼠血清TNF-α水平(p<0.01)。以上结果表明,在体内Pv也具有中和内毒素的作用。我们的研究表明Pv具有治疗脓毒症的潜能,可以用作对脓毒症的辅助治疗,鉴于Pv在鸡蛋中的丰富含量以及鸡蛋的来源广范性,这在临床上将具有十分重要的意义。