人TNF-β基因转染HepG2细胞对Survivin表达的影响

来源 :青岛大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:star2006111
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目的脂质体介导人TNF-β基因转染人肝癌细胞HepG2,检测TNF-β的表达,并同时检测、分析转染后HepG2细胞中Survivin的表达。方法用本实验室已成功制备的TNF-β真核细胞表达质粒pcDNA4C-TNF-βcDNA及其转化的E.coli JM-109感受态大肠杆菌,经质粒提取后,以脂质体为中介转染培养的人肝癌细胞HepG2,同时设立对照组(未转染组)。分别于转染后12h,24h,48h,72h和5d收集HepG2细胞及细胞上清液。取细胞上清液用ELISA法检测TNF-β表达。将收集的细胞充分裂解,取细胞裂解上清液用ELISA法检测Survivin表达。绘制标准曲线,JMTJFX 10.32统计分析软件进行相关统计检验。结果转染后,ELISA法成功检测到转染组中TNF-β的表达,绘制标准曲线,相关系数r=0.991,TNF-β的表达量24h最高,5d最低。同时检测到对照组中Survivin的表达,绘制标准曲线,相关系数r=0.985。对照组中Survivin的表达量24h最高,5d最低,转染组中Survivin的明显下降,统计学分析有高度统计意义。结论利用脂质体将质粒pcDNA4C-TNF-βcDNA成功转染HepG2细胞,转染后TNF-β稳定表达。Survivin在对照组HepG2细胞中明显表达,而TNF-β基因转染后HepG2细胞中Survivin的表达明显下调。为进一步研究TNF-β及Survivin对HepG2细胞的生物学效应奠定基础。
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