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小鹅瘟(GoslingPlague，GP)是由鹅细小病毒(GooseParvovirus，GPV)引起的雏鹅的一种急性或亚急性败血性传染病。1997年以来，在我国许多地区爆发了由鹅副粘病毒(GooseParamyxorirus，GPMV)引起的烈性传染病。该病以消化道病变为主要特征，具有高度的发病率和病死率，给养鹅业带来了严重的危害。小鹅瘟和鹅副粘病毒病在临床症状上比较相似，很难进行鉴别诊断。为了能对临床病例进行早期诊断，了解小鹅瘟和鹅副粘病毒病的混合感染情况，建立和研究特异、敏感、快速的双重PCR诊断方法具有重要意义。对黑龙江省GPV分离株的VP3基因进行克隆和序列分析，可为小鹅瘟的诊断与防治提供理论依据，并具有重要的流行病学意义和实际应用价值。
本实验根据GPV和GPMV两种病原体的基因保守序列，分别设计了与GPV的VP3、GPMV的F基因互补的2对引物。用这2对引物对人为混合样品中GPV的DNA模板及GPMV反转录后的cDNA模板进行双重PCR扩增，结果得到2条与试验设计相符的574bp(GPV)、884bp(GPMV)的特异性条带。研究表明本试验所建立的双重PCR方法，能在一次反应中对疑似由GPV、GPMV两种病原体引起的传染病进行鉴别诊断，且特异、敏感、快速、简便。利用此方法对2005年5月-8月黑龙江省9个市、县送检的病死雏鹅进行检测，结果表明7个市、县的病料均为GPV感染，未检测到鹅副粘病毒。
根据GPVB株基因序列，设计了扩增GPVVP3基因的3对引物，对7个地区小鹅瘟病料及疫苗株进行了扩增，结果得到VP3基因大小分别为574bp、477bp、699bp的片段。将该片段分别进行克隆及序列测定，并与GPV国内外已发表的毒株进行序列比较。结果表明，各分离株的VP3基因大小均为1605bp，分别编码534个氨基酸，序列分析表明7个GPV分离株VP3基因的同源性为99.0-99.8％；各分离毒株与东北农大2003年报道的分离株同源性为97.4-98％，说明不同年份的GPV分离株略有差异；与SYG(扬州大学)毒株的同源性为95.3-95.9％，表明省内与省外分离株稍有差异；与国外报道的B株同源性为96.4-97.1％。各分离株与国内疫苗株进行序列比较，同源性为97.6-98.3％。测序结果表明VP3基因3端核苷酸相对于5端保守，VP3Ⅱ区序列为高变区。序列分析还发现VP3蛋白的4个糖基化位点均表现出高度的保守性。由此可见，GPV黑龙江各分离株间VP3基因的变异非常小，这是目前GPV只有一个血清型的分子基础。各分离株VP3基因与番鸭细小病毒(Muscovyduckparvovirus，MDPV)的VP3基因进行序列比较，结果表明：与MDPV同源性为80.7-81.5％。