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目的：本研究旨在探讨成人急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia, ALL)患者中DNA甲基转移酶3A (DNA methyltransferase, DNMT3A)突变发生的频率、与其他临床特征间的相关性以及对患者预后的影响。方法：收集57例急性淋巴细胞白血病患者的骨髓或外周血细胞,使用Ficoll梯度离心法分离单个核细胞,提取基因组DNA后采用PCR的方法对DNMT3A热点突变所在的第23号外显子进行扩增,PCR产物纯化后测序,与正常基因组序列比对筛查突变结果。通过本科室生物标本库获取57例患者相关临床特征信息并进行统计分析。结果：在57例ALL患者中,共检测出3例(5.3%)携带DNMT3A R882H突变。T-ALL患者中突变的发生率明显高于B-ALL患者(P=0.048)。年龄在40至60岁之间的患者与其他年龄组相比具有更高的突变发生率(P=-0.042)。在全部患者中和T-ALL中,携带DNMT3A突变的患者与野生型患者相比整体生存期较短(P=0.02和P=0.014)。结论：DNMT3A突变在ALL中发生率较低,突变患者其整体生存期明显缩短,提示该突变对成人ALL患者的危险分级和治疗具有重要的意义。目的：本研究旨在研究成人急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)患者中DNA甲基转移酶3A (DNA methyltransferase, DNMT3A)突变发生的频率、与其他临床特征间的相关性以及对患者预后的影响。方法：收集392例成人急性髓系白血病患者的骨髓或外周血细胞,使用Ficoll梯度离心法从中获取单个核细胞,提取基因组DNA后采用PCR的方法对DNMT3A热点突变所在的第23号外显子进行扩增,PCR产物纯化之后测序,最后与正常基因组序列比对判读突变结果。通过本科室生物标本库获取392例患者相关临床特征信息并进行统计分析。结果：在392例AML患者中,共检测出37例(9.44%)携带DNMT3A R882突变,其中DNMT3A R882H29例(78.38%),R882C8例(21.62%)。DNMT3A突变阳性患者与野生型患者相比,年龄明显偏大,但在性别、白细胞计数、血红蛋白水平、血小板计数和初诊时原始细胞比例等方面无明显差异。DNMT3A突变主要集中于M4和M5中,与NPM1突变和FLT3-ITD突变之间存在明显正相关性(P<0.001)。在染色体核型分析中,DNMT3A突变主要集中在CN-AML中(83.78%,31/37,P<0.001)以及中危组中(91.89%,34/37,P<0.001)。生存分析显示,在整体AML和CN-AML患者中,DNMT3A突变阳性患者和野生型患者相比,OS(P=0.0218和P=0.0006)和EFS(P=0.0203和P=0.0006)均明显缩短。在CN-AML中,多因素分析结果显示DNMT3A突变可以作为一个独立的预后因素,提示较短的整体生存期(HR=1.986,95%CI1.207to3.269,P=0.007)。结论：DNMT3A突变在AML中发生频率较高,并且对患者预后具有不良影响,提示该突变对成人AML患者预后危险分级和治疗方案的选择具有重要的意义。目的：我们研究的目的在于利用TALENs技术构建一株携带DNMT3A突变的K562细胞系,并研究该突变对肿瘤细胞生物学效应的影响。方法：设计并使用快速模块组装法构建DNMT3A-TALEN质粒。TALEN质粒和供者质粒一起电转入K562细胞,之后用PCR的方法筛选携带DNMT3A R882H突变的克隆。用全外显子测序的方法检测DNMT3A-TALEN质粒可能存在的脱靶效应。蛋白质印迹技术检测DNMT3A和SLC7A11基因蛋白水平的表达变化。克隆形成试验和CFSE实验检测突变克隆的增殖能力。用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：本研究中,我们首次使用TALENs技术成功构建了一株携带DNMT3A R882H突变的K562细胞系。克隆形成试验和CFSE实验证实该突变可以明显促进细胞的增殖。表达谱芯片结果显示一些与GSH合成相关的关键基因表达明显升高,包括CTH,PSPH, PSAT1特别是SLC7A11(胱氨酸/谷氨酸转运体),从而导致突变克隆细胞内GSH含量升高。此外,检测细胞凋亡率结果显示突变克隆出现化疗抵抗,联合使用SSZ(柳氮磺胺吡啶)可以提高对化疗药物的敏感性。结论：本研究结果为DNMT3A R882H突变在AML发病机制中的作用提供了新的见解,DNMT3A R882H突变克隆细胞内GSH含量升高,出现化疗抵抗,联合使用SLC7A11的抑制剂SSZ可提高化疗药物敏感性,为携带DNMT3A R882H突变AML患者提供了新的诊疗思路。