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目的：头颈部鳞状细胞癌（Head and Neck Squamous Cell Carcinoma,HNSCC）的发病率在全身肿瘤中居第六位。由于头颈部重要器官集中，淋巴结丰富，故HNSCC的颈淋巴结转移使手术和放化疗的疗效受到制约。目前化疗已在头颈肿瘤尤其是发生颈淋巴结转移进展期患者的临床治疗中广泛应用。然而原发或获得性耐药的产生降低了HNSCC颈淋巴结转移患者的疗效。范可尼贫血（Fanconi anemia, FA）通路功能障碍能够改变肿瘤对DNA交联剂的敏感性，FANCD2作为FA通路的关键基因可能对肿瘤细胞生长及化疗敏感性的影响起重要作用。本研究拟通过应用shRNA干扰获得的FANCD2沉默效应稳定的HNSCC颈淋巴结转移HSC-4细胞系，研究FANCD2对HNSCC生长活性的可能作用并探讨沉默FANCD2表达对HNSCC颈淋巴结转移细胞化疗敏感性的影响及相关机制。方法：利用前期实验成功获得的FANCD2shRNA沉默的HNSCC颈淋巴结转移HSC-4细胞系，将实验细胞分为空白对照组：HSC-4（未经任何处理的野生型HSC-4细胞），阴性对照组：FANCD2-shRNA-C（含FANCD2无效干扰序列的HSC-4细胞）和实验组：FANCD2-shRNA（前期实验成功构建含FANCD2有效干扰序列且FANCD2稳定沉默的HSC-4细胞）三组。经细胞传代，嘌呤霉素筛选，免疫印迹法（Western Blot）检测FANCD2基因沉默效应，计算沉默效率。细胞增殖抑制试验（Cell Counting Kit-8，CCK-8法）检测FANCD2shRNA干扰后HSC-4细胞的生长增殖情况，流式细胞术（Annexin V/PI染色法）测定其凋亡和细胞周期改变； CCK-8法检测顺铂（Cis-diamminedichloroplatinum，CDDP）在不同时间点及不同浓度作用于HSC-4细胞的抑制率，并计算IC50值，流式细胞术测定CDDP作用后其凋亡和细胞周期改变以研究FANCD2shRNA干扰对HSC-4细胞化疗敏感性的影响。通过Western Blot检测FANCD2shRNA干扰后Bax、ERK1/2、P-ERK1/2和integrin β1蛋白表达变化来探讨FANCD2与上述蛋白的功能关系；检测三组细胞DNA交联剂作用后上述通路蛋白表达的变化，研究FNACD2shRNA沉默影响化疗敏感性的可能机制。结果：（1）Western Blot证实HNSCC颈淋巴结转移HSC-4细胞存在FANCD2蛋白的表达；前期实验设计的干扰序列使FANCD2沉默效应稳定，与对照组比较差异有统计学意义(F=514.179,P<0.05)，沉默效率为86%；（2）CCK-8结果显示shRNA沉默FANCD2表达能抑制HSC-4细胞增殖，且抑制效应具有时间依耐性。不同浓度CDDP作用48小时，三组细胞抑制率均随浓度增加而增高，各浓度组间（F=1247.992,P<0.05）和各细胞组间（F=118.724, P<0.05）差异均有统计学意义，且实验组抑制率增加较对照组明显；16μg/mlCDDP作用24、48、72小时，三组细胞抑制率均随时间延长而增高，各时间组间（F=575.013, P<0.05）和各细胞组间（F=37.709, P<0.05）差异均有统计学意义，且实验组抑制率增加较对照组明显；实验组细胞CDDP的IC50值（16.633±1.137）μg/ml比空白对照组（34.567±1.193）μg/ml和阴性对照组（30.400±0.089）μg/ml明显降低（F=229.887, P<0.05）；（3）流式细胞术检测发现三组细胞培养72小时后，实验组HSC-4细胞凋亡率（13.33％）较空白对照组（1.69％）和阴性对照组（5.05％）明显增高（F=403.277, P<0.05）；FANCD2shRNA干扰后细胞周期变化为G0/G1期比例增加，进入S期细胞减少（F=307.896, P<0.01）。0、2、5μg/ml CDDP作用48小时，实验组细胞凋亡率较空白对照组和阴性对照组增高（F0μg/ml=137.335, P<0.05；F2μg/ml=581.633, P<0.05；F5μg/ml=289.719, P<0.05），且凋亡率随药物浓度的增加而增高；细胞周期G0/G1期比例随CDDP浓度增加而增高，且实验组G0/G1期细胞比例与空白对照组和阴性对照组相比差异有统计学意义（F0μg/ml=4178.897, P<0.05；F2μg/ml=33.864, P<0.05；F5μg/ml=27.243, P<0.05）；（4）Western Blot结果显示shRNA沉默FANCD2表达，实验组Bax（F=15.168, P<0.05）和ERK1/2（F=14.888,P<0.05）蛋白表达较对照组增强，P-ERK1/2（F=35.288, P<0.05）和integrinβ1（F=2.583, P<0.05）蛋白表达降低；2μg/ml CDDP作用48小时后，实验组Bax（F=25.218, P<0.05）和ERK1/2（F=30.345, P<0.05）蛋白表达较对照组增强，P-ERK1/2（F=50.201, P<0.05）和integrin β1（F=22.227, P<0.05）蛋白与对照组相比表达降低。结论：（1）HNSCC颈淋巴结转移HSC-4细胞系中存在FANCD2基因表达，且FANCD2基因shRNA沉默效应在HSC-4细胞中稳定存在；（2）shRNA干扰沉默FANCD2表达能够抑制HSC-4细胞增殖，促进其凋亡并导致细胞周期阻滞，提示FACND2可能与HNSCC的生长活性有关，这为下一步研究FANCD2基因功能及相关机制奠定了实验基础；（3）shRNA干扰沉默FANCD2表达能提高人HNSCC颈淋巴结转移HSC-4细胞对DNA交联剂CDDP的化疗敏感性；（4）FANCD2基因可能参与Bax诱导细胞凋亡相关通路促进HSC-4细胞凋亡；ERK1/2表达增强激活了磷酸化途径，联合P-ERK1/2和integrin β1蛋白表达下调，可能与FANCD2共同作用抑制HSC-4细胞增殖，促进凋亡并导致细胞周期阻滞，从而实现化疗增敏；（5）上述研究提示FANCD2基因可能影响HNSCC颈淋巴结转移HSC-4细胞的生物学行为及化疗敏感性，有望为HNSCC尤其是发生颈淋巴结转移患者的治疗提供新的靶点和思路。