论文部分内容阅读
目的:白内障是一种多危险因素的眼部疾病。全球约一半的盲和三分之一的视力损伤是由白内障造成的。衰老、创伤、辐射暴露、眼科手术和基因遗传等原因均可导致晶状体浑浊，这会引起不同程度的视力下降，严重影响人类的生存质量，给社会和世界带来巨大的经济负担。目前，手术是国内外唯一有效治疗白内障的方法。然而，医疗资源分布不均、手术成本、信息和交通不完善以及患者心理因素等问题成为白内障手术的重大阻碍。因此，探究一种更易实施且容易被接受的非手术防治新方法，成为白内障领域可以研究的新方向。白内障的发病机制十分复杂，现有的研究结果仍无法清楚解释其发病过程。而晶状体上皮细胞过度凋亡，是公认的白内障形成的细胞学基础，是白内障发病的关键环节。在此基础上进一步研究影响晶状体上皮细胞凋亡的相关因素，探讨白内障可能的发病机制，为白内障的非手术治疗提供新思路。 研究方法:本研究利用过氧化氢(H2O2)构建SRA01/04细胞体外凋亡模型，采用实时荧光定量PCR法检测其miR-204的表达水平;采用瞬时转染法向细胞中转染miR-204模拟物(mimic)、miR-204抑制物(inhibitor)及其两者各自的阴性对照(negative control)，分别上调和下调其miR-204的表达水平，转染48小时，采用实时荧光定量PCR法验证转染效率;采用AnnexinⅤ/PI双染色法，流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率;利用microRNA数据库及靶基因分析软件，预测miR-204可能的靶基因;采用实时荧光定量PCR法检测各组SIRT1 mRNA的表达水平变化。 结果:1、与正常人晶状体上皮细胞相比，miR-204在体外凋亡模型中的相对表达量显著增加(P＜0.05)。2、转染48小时后，实时荧光定量PCR结果可见，miR-204 mimic组的细胞中miR-204的表达水平显著高于其对照组(miR-204mimic control)，而转染miR-204 inhibitor组的细胞中miR-204的表达水平显著低于其对照组(miR-204 inhibitor control)(P＜0.05)。3、在各组转染细胞中，上调miR-204的表达水平可以促进过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞凋亡，细胞凋亡率显著上升;而下调miR-204的表达水平可以抑制过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞凋亡，细胞凋亡率显著下降(P＜0.05)。4、microRNA靶基因预测软件的结果显示:SIRT1基因与miR-204存在潜在结合位点。miR-204与SIRT1 mRNA表达水平呈负相关，上调miR-204的表达水平可以显著降低SIRT1 mRNA的表达水平;而下调miR-204的表达水平可以显著升高SIRT1 mRNA的表达水平(P＜0.05)。 结论:1、miR-204在人晶状体上皮细胞系SRA01/04体外凋亡模型中高表达。2、miR-204可能通过靶向调控SIRT1的表达，影响人晶状体上皮细胞的凋亡过程，从而在以晶状体上皮细胞凋亡为基础的白内障发病机制中发挥作用。