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1.研究背景和目的近十余年来,禽流感病毒H5N1、H7N9等频繁从禽类跨越物种间屏障直接感染人,对人类健康和公共卫生安全构成巨大威胁。研究表明,甲型流感病毒均来自水禽类,陆地禽类在流感病毒生态系统中可能起到中间宿主的作用。流感病毒从水禽传递到陆禽后,在新宿主(陆禽)体内,病毒基因发生适应改变、形成稳定谱系甚至流行。同时,陆禽流感病毒受体分布特点与人的分布特点相似,此时在陆禽宿主已发生适应性进化的禽流感病毒具备了感染人的潜能。H9N2禽流感病毒已经成为中国家禽分布最广泛的禽流感亚型,同时H9N2亚型病毒在新型禽流感病毒的形成过程中扮演了关键角色,其传播路线具有代表性和实际意义。本文在前期研究的基础上比较水源性禽流感病毒H9N2在陆地禽类鹧鸪、鸡体内的复制能力,旨在探索陆地禽类在流感病毒变异演变特别是主要进化和传播方向上所起的作用,以及为进一步筛选新的中间宿主提供实验基础。2.实验方法2.1动物感染实验：采用流感病毒动物接种法,通过滴鼻、滴眼、滴咽等途径接种病毒。2.2流感病毒的分离和鉴定：根据前期预实验结果,选择采集实验动物第三、五、七天的咽拭子和肛拭子标本,接种鸡胚,收取鸡胚尿囊液并利用血凝试验检测尿囊液中病毒含量来确定实验动物排毒情况。2.3 TCID50实验：TCID50实验是一种病毒毒力检测方法。将收集到的实验动物咽拭和肛拭子标本接种细胞,通过镜下观察细胞病变情况和病毒毒力检测,判断标本是否有病毒。2.4感染病毒的病理变化：处死上述感染实验所用的动物,取气管、支气管、肺等组织,加10%福尔马林固定24h。组织脱水、包埋、切片,脱蜡至水,HE染色,显微镜下观察结果。2.5免疫组化实验检测病毒抗原：组织切片中流感病毒NP抗原的检测,需要免疫组化法,将上述组织切片脱蜡至水,抗原修复,血清保护,抗原抗体结合,标记流感病毒抗原,显微镜下观察结果。3结果：3.1水禽鸭H9N2亚型禽流感病毒DK/ST/3208/2012可在陆禽鹧鸪呼吸道复制,但未能在陆禽鸡体内复制。3.2陆禽鹌鹑H9N2亚型禽流感病毒QA/GX/3139/2012可在陆禽鹧鸪呼吸道复制,但未能在陆禽鸡体内复制。3.3鸭H9N2亚型禽流感病毒DK/ST/3208/2012和陆禽鹌鹑H9N2亚型禽流感病毒QA/GX/3139/2012体内接种鹧鸪后可引起气管、支气管和肺部炎症反应等病理变化。4.结论：4.1水禽鸭H9N2亚型禽流感病毒可在陆禽鹧鸪复制并引起明显炎症反应,表明鹧鸪易于感染水禽源性禽流感病毒,提示鹧鸪在流感病毒生态系统中起中间宿主作用。4.2陆禽鹌鹑H9N2亚型禽流感病毒可在鹧鸪复制并引起明显炎症反应,表明鹌鹑H9N2亚型禽流感病毒易于传播到鹧鸪,提示鹧鸪可能有助于病毒进化和变异演变,形成感染哺乳动物和人的潜能。4.3鹧鸪呼吸道是H9N2亚型禽流感病毒复制的主要部位。