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顺铂(Cisplatin)是肺癌临床治疗中较为常用的一种化疗药物,尤其对小细胞肺癌效果明显。然而,在一段时间的治疗后,由于癌细胞的产生的耐药性限制了Cisplatin的应用。本研究利用梯度增加Cisplatin浓度的方式诱导得到了3株肺癌细胞耐药株—-H446/DDP、H460/DDP及A549/DDP细胞。在获得耐药株后,通过MTT法、CCK8法、流式细胞术及Westemblot技术深入的研究了PI3K/Akt信号通路与肺癌细胞Cisplatin间的关系,并从细胞水平上证明抑制PI3K/Akt信号通路能有效的逆转肺癌细胞的Cisplatin耐药。经过研究得到以下结果：1)结果显示,3株细胞均获得了cisplatin耐药的特性。cisplatin对H446/DDP. H460/DDP及A549/DDP等3株耐药细胞的IC50值分别为27.0±1.3 μmol/L、 53.0±5.2 pmol/L及70.7±3.5μmol/L,而cisplatin对其亲本细胞的IC50值分别为2.4μmol/L、8.8±1.5 μmol/L及11.4±2.8μmol/L,耐药指数分别为1I.3、6.1及6.2；2)相对于其亲本细胞而言,3株肺癌耐药细胞株的生长速率均明显变缓,该现象可能与细胞主动调整细胞周期,逃避cisplatin损伤有关；3)3株耐药细胞的PI3K/Akt信号通路均存在异常激活,提示cisplatin耐药与PI3K/Akt信号通路有着重要的联系；4) H446/DDP、H460/DDP及A549/DDP细胞分别经5.0μmol/L、5.0μmol/L和2.5 pmol/L的wortmannin的处理后,细胞内的Akt磷酸化水平能降至其对应亲本细胞株的水平；5)MTT实验显示,H446/DDP、H460/DDP及A549/DDP细胞单独使用cisplatin处理时,ICso值分别为27.0±1.3 pmol/L、53.0±5.2μmol/L及70.7±3.5 μmol/L。经5.0μmol/L、5.0 μmol/L和2.5 pmol/L的wortmannin的处理后的IC50值分别为2.4±1.3μmol/L、6.7±0.3和9.6±1.2μmol/L;6)流式细胞实验显示wortmannin能与cisplatin协同促进3株肺癌耐药细胞凋亡。当cisplatin浓度达到40μmol/L时,单独使用cisplatin处理组,H446/DDP细胞、H460/DDP细胞和A549/DDP细胞的凋亡率分别为40.0%、16.8%和21.7%。当细胞经5.0μmol/L、5.0μmol/L和2.5 pmol/L的wortmannin与cisplatin共处理后,细胞的凋亡率分别为60.5%、46.9%和58.7%；7) Caspase活性检测实验均显示,wortmannin能协同cisplatin诱导细胞凋亡。当培养体系加入wortmannin后,细胞中Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9的活性显著增高,提示较单独cisplatin处理组,wortmannin与cisplatin共处理更有效促使细胞启动凋亡级联反应;8、PI3K/Akt信号通路可以通过激活Bad蛋白,抑制由肺癌耐药细胞株Bcl-2/Bax介导的线粒体凋亡程序,当该通路被抑制后,凋亡途径重新被开启。