论文部分内容阅读
研究背景和目的食管癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,发病率居世界第八位;癌症相关死亡率居第六位。我国是食管癌高发国家之一,死亡率居第四位,以鳞状细胞癌多见,且多数食管癌患者出现症状且确诊时已属中晚期,并倾向于早期转移,食管癌的疗效及预后欠佳。所以,发现使食管癌对治疗敏感性增强的因素很重要。近年来研究的RIP1含有一个C末端死亡结构域,一个N末端丝氨酸/苏氨酸激酶。目前RIP1在食管癌细胞的凋亡、增殖及治疗敏感性的作用尚不清楚。该课题研究RIP1对DDP诱导的食管癌细胞凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨。方法常规体外培养细胞,DDP处理KYSE510和KYSE410食管鳞癌细胞株,MTS法检测不同浓度DDP对KYSE510、KYSE410细胞的增殖抑制作用,Annexin V/PI双染流式细胞术检测DDP处理后两株食管鳞癌细胞的凋亡率,Western blot检测DDP处理前后食管癌细胞中RIP1、caspase-3、PARP、JNK、p-JNK的蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测RIP1m RNA的水平。流式细胞术检测细胞线粒体膜电位变化,Nec-1联合DDP处理两株细胞前后凋亡率、ROS在KYSE510细胞中的变化。si RNA特异性沉默RIP1,Western blot检测沉默后RIP1蛋白水平,流式细胞术检测沉默RIP1后DDP处理KYSE510细胞的凋亡率,Western blot检测沉默RIP1后DDP处理食管癌KYSE510细胞中caspase-3、PARP、JNK、p-JNK的蛋白水平。结果DDP诱导食管癌细胞凋亡具有剂量和时间相关性,KYSE510和KYSE410细胞对DDP的IC50分别为(5.021±0.069)μg/ml、(40.169±0.302)μg/ml,后者是前者的8倍,相比有显著性差异(P<0.01)。凋亡率随DDP剂量增加和时间延长升高,RIP1蛋白的表达升高,KYSE510的m RNA水平表达较KYSE410高。相同剂量的DDP作用于两株食管癌细胞,KYSE510细胞中caspase-3、PARP、p-JNK活化明显,而KYSE410细胞则变化不大。Nec-1联合DDP处理两株细胞,KYSE510细胞凋亡率减少,线粒体膜电位较对照组下降,ROS产生较多。si RNA转染沉默RIP1后,促进了KYSE510细胞的增殖,KYSE510细胞凋亡率减少,明显低于阴性对照组。siRNA转染沉默RIP1后,KYSE510细胞中RIP1、p-JNK蛋白表达明显下降。结论RIP1可能参与并增强了DDP诱导食管癌细胞凋亡的作用;RIP1在食管癌细胞凋亡中的调控可能与依赖caspase的凋亡和JNK信号转导通路有关。