匍匐翦股颖对盐胁迫的响应和AsNHX2基因功能研究

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匍匍翦股颖(Agrostis stoloniferaL.)属于禾本科翦股颖属,冷季型草坪草,它具有良好的叶片质地、耐低修剪和抗冻性,是世界上城市绿地、高尔夫球场和保龄球场等高质量草坪中应用最广泛的草种。但由于耗水量大,耐盐性不够理想,限制了它更大的应用范围。目前,对盐胁迫下匍匐翦股颖的生理和分子响应、耐盐性相关基因的克隆与功能鉴定以及高光谱反射特征的研究还非常有限。本研究以Penncross和SeasideⅡ为材料,探讨了盐胁迫下的光合作用、抗氧化代谢、抗氧化酶基因表达和叶片高光谱特征等生理和分子响应机制;构建了高光谱反演电解质渗透率模型;克隆了Penncross AsNHX2基因并对其功能进行了初步鉴定。研究结果如下:1、通过测定盐胁迫下Penncross和SeasideⅡ的草坪质量、叶绿素、抗氧化酶活性表明:第10天Seaside Ⅱ的草坪坪观质量、叶绿素含量、光合速率以及CAT、APX和POD的活性要比Penncross好;而SOD活性则低于Penncross,但在盐处理后期SeasideⅡ要高于 Penncross。2、采用qRT-PCR对盐胁迫下5个抗氧化酶基因的表达分析表明:在盐处理的第3h,Seaside Ⅱ CytCu/ZnSOD和POD的表达量要低于Penncross,但在12h后要高于Penncross;APX的表达量在3h后高于Penncross;FeSOD和CAT表达量一直高于Penncross。3、在分析盐胁迫下Penncross和Seaside Ⅱ叶片EL与高光谱反射率特征参数相关性的基础上,利用回归法建立反演模型表明:以541nm、617nm和651nm波段反射率,541nm、617nm 波段和 651 nm、718nm 波段构成的 NDVI,667nm、668nm 波段构成的DVI,以及绿边幅值和绿边面积为自变量,采用偏最小二乘回归法反演叶片EL的模型精度高。4、采用同源克隆与RACE技术克隆了 Penncross的AsNHX2基因,该基因ORF为1617bp,属于第一类NHX家族。AsNHX2基因在新叶中的表达量最高,受盐、低温和SA诱导上调。通过构建该基因的两个植物表达载体,转化烟草表明:在液泡膜中观察到了明亮的荧光。在盐胁迫下,转基因植株有较好的生长状态、K+离子吸收能力、光合作用效率和降解活性氧的能力,能提高NtSOD、NtCAT、NtDREB4初NtP5CS的表达量。综上所述,在盐胁迫下Penncross和Seaside Ⅱ的生理和分子响应有差异,SeasideⅡ的各指标前期低,但在后期则高于Penncross;基于偏最小二乘法构建的高光谱模型,能较好的反演盐胁迫下的电解质渗透率;AsNHX2基因定位于液泡膜中,对提高植物耐盐性有积极作用。
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