根结线虫生防菌的筛选与应用研究

来源 :中国矿业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tananhua252
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本研究通过对江苏全省根结线虫病害分布情况进行调查,在大部分设施蔬菜,甚至一些其他经济作物产区均发现不同程度的根结线虫病害。经单卵块繁殖对采集到的根结线虫样品进行纯化培养,结合雌虫、雄虫和二龄幼虫形态学特征观察及相关特征值测量,并利用分子生物学方法,对江苏省根结线虫种类进行了鉴定。结果发现,江苏省主要根结线虫群体为南方根结线虫。为了有效防治南方根结线虫,本研究从根结线虫病情较轻的植株根际分离细菌,利用产蛋白酶活性及产纤维素酶活为指标进行初筛;筛选得到2株两种酶活性都比较高的菌株:Jdml和Jdm2,两株菌均从瓜蒌根际分离得到。在离体条件下研究其对南方根结线虫二龄幼虫活性及卵孵化的影响。结合菌株形态学、生理生化试验以及分子生物学方法,鉴定出菌株Jdml为蜡样芽孢杆菌,菌株Jdm2为枯草芽孢杆菌。在温室盆栽试验中,两株生防菌均能较好地在番茄根际定殖,不仅对番茄根结线虫有显著的防效,而且能够显著促进番茄植株生长。选取防效、促生能力以及定殖能力均比较高的菌株Jdm2进行田间小区试验,并比较了其与一种杀线剂Avermectins作用效果。研究发现,单独使用生防菌Jdm2、单独使用Avermectins或者两者混用,在最初的30d防效都比较高,均可达到69%以上。之后随着栽培时间的增加,防效不同程度地下降,其中Avermectins处理下降最快,而生防菌Jdm2处理后期防效趋于平稳。另外,生防菌Jdm2处理还可能明显增加番茄产量,增产可达31%,相比之下,Avermectins增产不明显,仅为13%,而混用处理增产水平与单用生防菌增产水平相当,增产率为34%。在田间小区试验中,我们还采用PCR-DGGE技术对处理后番茄根际细菌群落结构进行监测。分别对三个采样时期的DGGE图谱进行了聚类分析并进行了显著性检验,结果发现,生防菌Jdm2处理对番茄根际细菌群落结构影响随着栽培时间的推移逐渐减小。在第15d,生防菌Jdm2处理组对照组相似性非常低,差异十分显著(d-value>100)。到第30d,生防菌Jdm2处理组与对照组相似性已在80%以上,差异减小(d-value=12.2)。到了第60d,生防菌Jdm2处理组与对照组相似性超过95%,没有明显的差异(d-value=0.9)。相比之下,Avermectins处理组与对照组相似性保持在一个比较稳定的水平。通过对整个监测期的综合研究发现同一采样时期的DGGE图谱在聚类分析时相似度较高,而不同时期样品相似度较低;主成分分析也显示同一采样时期的不同样品在PCA图中离散较小,而不同采样时期离散较大,这说明番茄生长阶段对番茄根际细菌群落影响较大,生防菌引入初期虽然会对番茄根际细菌群落结构产生一定程度的影响,但后期这种差异逐渐减小,并恢复到对照水平。总体来看,生防菌的引入不会对土壤细菌群落结构造成威胁。为了研究活体生防菌与植物源农药混合使用对根结线虫的防治效果,利用生防菌Jdm2分别与植物源农药苦参碱、印楝素和藜芦碱混用对黄瓜根结线虫进行防治。研究发现,单独使用各菌(药)剂时,生防菌Jdm2、苦参碱、印楝素及藜芦碱对黄瓜南方根结线虫的防效分别是42%、48%、48%和30%,分别使黄瓜增重14%、18%、25%和10%。当Jdm2分别与苦参碱、印楝素和藜芦碱混用时,防效分别达56%、54%和44%,对黄瓜增重分别达到31%、27%和18%。可知在各自减量的情况下,生防菌与生物源农药混用可对黄瓜根结线虫的防治起到增效作用。
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