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目的:本文通过检测人结直肠癌组织及肿瘤细胞中p16、p21、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)衰老标志物以及糖代谢途径关键酶的表达变化,试图探讨结直肠癌衰老活性及其与糖代谢重编程的关系。方法:1人结直肠癌标本:收集河北医科大学第四医院外二科人结直肠癌患者63例,取其手术切除标本,以距肿瘤10 cm以外的正常肠粘膜组织为对照组。石蜡切片用于免疫组织化学染色检测p16和p21的表达。冰冻切片用于检测细胞SA-β-Gal活性。2人结肠癌细胞株:TNF-α处理的人正常结直肠粘膜细胞系FHC细胞及三种人结肠癌细胞系HCT116、HT29、CACO2细胞,进行MTT分析,以及SA-β-Gal染色。3葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)和丙酮酸激酶-2(PKM2)表达分析:提取结直肠癌新鲜组织或细胞总蛋白,用Western blot方法检测G6PD和PKM2的表达;提取总RNA,逆转录后进行实时荧光定量聚合酶链式反应,检测G6PD、PKM2 mRNA水平。4己糖激酶(HK)活性测定:按试剂盒说明书操作。结果:1人结直肠癌肿瘤组织中p16和p21表达下调,SA-β-Gal活性降低免疫组织化学染色结果显示,人结直肠癌肿瘤组织中衰老相关蛋白p16、p21表达低于癌旁正常组织(P<0.05);并且肿瘤组织衰老相关标志物SA-β-Gal染色强度低于癌旁正常组织(P<0.05)。2 TNF-α诱导人结肠癌细胞SA-β-Gal活性降低,活力增强使用TNF-α对人结直肠癌细胞株HCT116、HT-29、Caco-2和正常结直肠粘膜细胞株FHC刺激72h,而后进行SA-β-Gal染色及MTT分析。结果显示,相同刺激条件下,HCT116、HT-29和Caco-2三种肿瘤细胞SA-β-Gal活性低于FHC细胞(P<0.05);MTT分析显示,TNF-α诱导三种肿瘤细胞活力较FHC细胞升高(P<0.05)。3人结直肠癌肿瘤组织中G6PD、PKM2表达升高qRT-PCR和Western blot结果显示,人结直肠癌肿瘤组织中G6PD、PKM2 mRNA和蛋白表达均高于癌旁正常组织(P<0.05)。4人结直肠癌细胞中G6PD、PKM2和HK表达及活性升高Western blot结果显示,HCT116、HT-29和Caco-2三种人结肠癌肿瘤细胞中G6PD、PKM2蛋白表达高于FHC正常结直肠粘膜细胞(P<0.05);细胞免疫荧光结果显示,人结肠癌肿瘤细胞中PKM2蛋白表达量高于正常结直肠粘膜细胞(P<0.05);并且三种肿瘤细胞中己糖激酶(HK)活性明显高于正常结直肠粘膜细胞(P<0.05)。结论:1人结直肠癌组织细胞中p16、p21蛋白表达下调,SA-β-Gal活性降低,细胞活力升高;2人结直肠癌组织细胞中,糖酵解途径关键酶G6PD、PKM2和HK的表达及活性升高;3人结直肠癌组织细胞具有更强的抗衰老生存能力,糖酵解代谢增强。