树舌灵芝液体深层发酵菌丝体化学成分研究

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树舌灵芝在分类上隶属于灵芝属,是珍贵的药用真菌。现代医学和药理学的很多研究表明,树舌灵芝具有提高免疫力、抗肿瘤、抗病毒、抗菌消炎等活性,因此,近年来对树舌灵芝化学成分的研究越来越引起人们的重视。来自不同产地的树舌灵芝因受不同地理条件、环境条件等的影响,其化学成分组成及含量有所不同,致使其药性具有一定差别,为树舌灵芝的实际应用带来困难。为解决这一难题,树舌灵芝液体深层发酵目前被人们广泛关注。为了给树舌灵芝化学成分的系统研究增添新的内容,推进树舌灵芝化学成分研究进展,并为其进一步的药理学研究和临床应用研究奠定基础,本论文在前人研究的基础上,对树舌灵芝液体深层发酵菌丝体的化学成分做了进一步的研究与探讨。本文采用专门化的定性方法对菌丝体的化学成分进行了分析,检测到菌丝体中含有糖类、甾类、萜类、挥发油、有机酸、香豆素及生物碱类化合物;对测定萜类含量的香草醛—冰醋酸—高氯酸分光光度法进行了优化,为快速、准确检测树舌灵芝中总三萜类化合物含量提供了可靠、灵敏的检测方法;通过实验确定的最优测定条件为φ(香草醛-冰醋酸)=5%溶液0.2ml,高氯酸0.8ml,70℃水浴反应20min,冰浴冷却,加冰醋酸5.0ml,测定波长570nm;通过此方法测定菌丝体和子实体中总三萜类化合物的含量分别为10.40%和23.02%;通过有机溶剂温浸提取菌丝体的化学成分,采用低温、低醇离心的方法,经硅胶柱层析和大孔树脂吸附层析对提取物进行分离纯化,通过薄层制备、结晶、重结晶等方法获得4个单体化合物,经核磁共振谱、紫外、红外等光谱分析鉴定,结合文献,鉴定出三种化合物:麦角甾醇、甘露醇和赤藓糖醇,其中赤藓糖醇属于首次从树舌灵芝中分离得到;首次对树舌灵芝菌丝体不皂化物的成分组成进行了分析,采用甲醇—氢氧化钾皂化法对菌丝体乙醚提取物进行皂化反应,获得不皂化物,应用气质联机进行分析,结合谱库检索及人工分析鉴定出21个已知化合物和1个未知化合物,主要分为烷烃、乙酰菲、甾醇和丁羟甲苯这四类,其中丁羟甲苯、乙酰菲、2-溴基十二烷、1-碘代十八烷和5,6-二氢麦角甾醇均为在树舌灵芝化学成分研究中首次报道。未知化合物的理化性质及结构目前正在分析中。在不皂化物中甾类化合物和丁羟甲苯的含量非常高,有研究表明甾类化合物和丁羟甲苯分别具有多种生物活性,二者同时存在于菌丝体不皂化物中且含量很高,这对不皂化物药理活性的影响需要进一步药理学实验研究证明,以期为正确评价树舌灵芝液体深层发酵菌丝体的药用价值提供理论依据,也为其进一步开发利用奠定基础。
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