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目的应用巢式甲基特异性PCR法(nested methylation specific PCR,nMSP)和DNA克隆测序检测成人急性白血病P16基因的甲基化状态,探讨P16基因甲基化与白血病发生、发展可能的关系,从而进一步阐明白血病发生、发展的可能机制;探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)逆转人急性白血病U937细胞株P16基因甲基化状态及调节转录作用、诱导蛋白重新表达及其可能的机制。方法采用nMSP和DNA克隆测序检测成人急性白血病P16基因的甲基化状态;采用SRB法检测EGCG对人白血病细胞系U937细胞增殖、活力的影响;nMSP法检测药物作用前后P16甲基化状态变化,RT-PCR法检测P16、甲基转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B基因mRNA的表达,Westren Blot蛋白免疫印迹法检测P16蛋白的表达,应用流式细胞仪DNA倍体分析法探讨EGCG对U937细胞周期的影响。结果1. 82例急性白血病(AL)患者P16基因甲基化的出现率为39.0%,其中急性髓系白血病(AML)患者为41.4%,24例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者为33.3%,初治AL患者为36.6%而复发则为54.5%;82例AL患者中有6例P16基因缺失,缺失率为7.3%,AML、ALL分别为1.7%和20.8%;16例健康自愿者或非恶性血液病患者P16基因则未发生甲基化或缺失;2.与对照组相比,不同浓度EGCG作用后均可抑制细胞增殖、诱导细胞分化,G0-G1期细胞比例增加;3. EGCG作用72h后P16基因甲基化程度明显减弱,P16基因异常甲基化的现象被逆转; 4.未处理组细胞P16基因不表达,EGCG作用72h后P16基因在mRNA和蛋白水平表达增强;5.与未处理组相比,EGCG作用72h后甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B的表达下降并呈浓度依赖性,而DNMT1表达不受影响。结论1. P16基因甲基化在成人急性白血病中有较高的检测率,且复发患者检出率较初治者高,可能与成人急性白血病的发生发展密切相关;2. EGCG在体外对U937细胞逆转甲基化的机制之一可能与直接抑制甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B或(和)通过S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)间接抑制DNMTs从而逆转P16基因甲基化状态有关;3. EGCG在体外能够诱导U937细胞中异常高甲基化的抑癌基因P16基因启动子CpG岛DNA去甲基化,从而恢复P16基因mRNA水平和蛋白水平的表达,实现其细胞周期调控功能,将细胞阻滞于G0-G1期,抑制肿瘤细胞的增长。