论文部分内容阅读
第一部分低温对大鼠胶质细胞间缝隙连接通讯功能的影响目的：探讨低温治疗对大鼠胶质细胞间缝隙连接通讯(gap junctional intercellular communication，GJIC)功能的影响。材料与方法：由大鼠神经干细胞诱导培养出神经胶质细胞至致密单层，分别继续在常温、低温、常温轻度缺氧、低温轻度缺氧培养，利用划痕标记染料示踪技术(scrape-loading and dye transfer，SLDT)测定GJIC水平。利用PCR、免疫细胞化学方法观察温度影响胶质细胞间Cx43表达情况。结果：常温组(组①)染料5min扩散距离为160.5±8.6μm；低温组(组②)GJIC明显受到抑制，扩散距离为126.2±10.4μm；常温轻度缺氧组(组③)扩散距离为154.1±6.9μm；低温轻度缺氧组(组④)扩散距离为122.8±6.0μm。①与②、③与④统计学上有显著差异，①与③、②与④无统计学上差异。胶质细胞30℃培养24h组：标记Cx43的罗丹明红色荧光强度值81.7±2.6，单个荧光斑平均相对面积67.82±14.16；胶质细胞37℃培养24h组：标记Cx43的罗丹明红色荧光强度85.0±7.9，单个荧光斑平均相对面积234.85±90.99。两组荧光强度无统计学筹异(p＞0.05)，但37℃培养24h组单个荧光斑平均相对面积大于30℃培养24h组细胞(p＜0.01)，具有显著差异。Real-time PCR结果：37℃组Cx43信号通路基因的表达量是30℃组的2.67倍。应用统计软件SPSS11.0进行方差分析，p＜0.05说明两组的Cx43信号通路基因的表达差异具有统计学意义。结论：低温降低神经胶质细胞间GJTC功能，可能是低温治疗颅脑创伤有效的作用机制之一。第二部分脑蛋白水解液对大鼠胶质细胞缝隙连接通讯的研究目的：探讨脑蛋白水解液对大鼠神经胶质细胞间缝隙连接通讯(gap junctional intercellular communication，GJIC)功能的影响。材料和方法：由大鼠神经干细胞诱导培养出神经胶质细胞至致密单层，分为给药组①、对照组②、TPA阳性对照组③继续培养，利用划痕标记染料示踪技术(scrape-loading and dye transfer，SLDT)，以荧光染料在细胞间的扩散作为评价缝隙连接通讯的指标，测定脑蛋白水解液对大鼠胶质细胞缝隙连接通讯的影响；RT-PCR法检测给药组和对照组细胞Cx43mRNA表达变化。造成轻度缺氧实验分组：④常氧对照组，⑤常氧给药组，⑥轻度缺氧对照组，⑦轻度缺氧给药组，⑧TPA阳性对照组，检测GJIC。结果：脑蛋白水解液组染料5min扩散距离为189.8±6.6μm；对照组扩散距离为154.7±6.0μm；组间统计学上有显著差异(p＜0.05)；RT-PCR检测结果显示给药组细胞中Cx43mRNA表达高于对照组细胞(p＜0.05)。组④染料5min扩散距离为157.5±5.9μm；组⑤扩敞距离为198.2±8.8μm；组⑥染料5min扩散距离为153.8±7.6μm；组⑦扩散距离为195.9±12.9μm。组④与组⑤、组⑥与组⑦统计学上有显著差异(p＜0.01)；组④与组⑥、组⑤与组⑦无显著性差异(p＞0.05)。结论：在本实验条件下，无论常氧还是轻度缺氧条件下，脑蛋白水解液可增强大鼠胶质细胞缝隙连接通讯，增强胶质细胞Cx43mRNA表达，提示脑蛋白水解液可能通过增强GJIC对胶质细胞起一定作用。第三部分低温抑制免血管平滑肌细胞间缝隙连接通讯的研究目的：探时凝血块混合物对血管平滑肌缝隙连接通讯(gap junctional intercellular communication，GJIC)功能的影响，阐明低温治疗具有抑制此种GJIC的作用。资料和方法：培养兔血管平滑肌细胞至致密单层，分别加凝血块混合物在常温、低温下培养组，以及无凝血块混合物的常温培养组，利用划痕标记染料示踪技术(scrape-loading and dye transfer，SLDT)测定GJIC水平。结果：加凝血块混合物常温组(组①)染料5min扩散距离较无凝血块混合物的常温培养组(组②)远；加凝血．块混合物低温组(组③)扩散距离较组①染料5min扩散距离明显缩短。①与②、①与③统计学上有统计学意义(P＜0.01)。结论：凝血块混合物具有增强血管平滑肌细胞GJIC的功能；低温具有降低此种GJIC功能的作用，可能是低温治疗蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage，SAH)后脑血管痉挛(cerebral vasospasm，CVS)的作用机理之一。