布鲁氏菌病（Brucellosis）是一种细菌性的临床上常以长期发热、多汗、关节炎、淋巴结与肝脾肿大为特征,而且还容易造成动物的流产、不孕及睾丸炎等疾病人畜共患病,由布氏菌属的胞内细菌引起,在世界许多地方仍是一个严重的农业、全球健康和经济问题。近几年布鲁氏菌病流行趋势日趋严重,我国在防控布鲁氏菌病疫情的形式上也不容乐观。细菌EF-Tu参与蛋白质的合成,介导氨酰-tRNA进入核糖体的空位,是一种重要的延伸因子,在原核生物中广泛存在,而且高度保守。最近的研究表明,EF-Tu是一种重要的多功能蛋白,不仅仅是作为蛋白翻译因子起作用,而且更重要的是EF-Tu参与许多重要的细胞和疾病过程,包括信号传导、翻译控制、凋亡、细胞骨架组成等。但目前很少有研究表明这种蛋白质在布鲁氏菌中的作用。其中一个重要的原因是目前还没有专门的工具来识别这种蛋白质。本研究利用原核表达的EF-Tu蛋白免疫BALB/c小鼠,免疫的BALB/c小鼠抗体效价达到单克隆抗体制备的标准后,经细胞融合、间接ELISA筛选、5次亚克隆获得1株稳定分泌单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,命名为BD6。应用Western-blot与间接荧光免疫的方法鉴定其特异识别布鲁氏菌EF-Tu蛋白。继而用肽扫描法筛选并鉴定了其抗原表位¹¹⁰QTREHIL¹¹⁶。生物信息分析表明,该抗原决定区位于一个高亲水性的区域,并形成了阿尔法螺旋体的一部分。最后,我们利用BD6 MAb识别的抗原表位作为检测抗原,对50例临床牛血清进行Dot blot检测,与RBPT和Brucella-Ab C-ELISA两种检测方法相比,阳性吻合率100%,阴性吻合率95%,Dot blot检测结果具有很高的符合率。这些发现将为研究布鲁氏菌的抗原结构提供了有用的信息,并且可能对布鲁氏菌感染的抗原决定簇疫苗的开发或对布鲁氏菌的诊断具有重大价值,为研究布鲁氏菌EF-Tu蛋白的潜在功能提供了强有力的工具。