刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是人畜共患细胞内寄生性原虫，所致的弓形虫病呈世界性分布，全球约1/3的人受感染，严重危害人类和动物的健康。本研究首次对广东省分离的来源于猫和猪的9株弓形虫虫株以及国际标准强毒株RH株、QHO绵羊株及加拿大美洲狮株的微线体蛋白4基因序列进行PCR扩增、克隆、测序和序列分析，通过网络利用BLAST进行同源性搜索，用Clustal X l.81程序对实验获得的和GenBankTM下载的弓形虫基因序列进行比对，然后用PUZZLE4.1程序分析各个虫株之间的遗传距离。同时利用DNAstar5.0中的Megalign程序进行相似性分析及计算碱基组成、转换、颠换分析。结果显示，9个虫株均得到1743bp的mic4基因序列，共检测到12个变异位点，变异率为0.69％。种系发育关系分析表明，mic4基因不能有效地区分弓形虫强、弱毒株，也无法区分基因型，但可作为分子标记用于弓形虫与其它原虫的种间鉴定。　　 本研究构建了pVAX-MIC4、pVAX-ROP16和pVAX-ROP18真核表达质粒，用PBS稀释到100mg/μL，肌肉注射免疫昆明鼠，并设立空载体pVAX1、PBS和空白( Control)对照组。初次免疫后分别于第2w和第4w各加强免疫一次，测定相应的体液免疫和细胞免疫应答指标，并于三免后第10d，用弓形虫RH株速殖子腹腔感染昆明鼠，观察其存活时间。　　 研究结果显示，pVAX-MIC4、pVAX-ROP16和pVAX-ROP18 DNA疫苗免疫昆明鼠可有效地诱导产生体液免疫和细胞免疫反应，实验组小鼠存活时间明显延长，能够有效地提高昆明鼠抗弓形虫感染能力，且pVAX-ROP18组免疫效果明显好于pVAX-MIC4和pVAX-ROP16组的免疫效果。本研究将为今后弓形虫疫苗的研制和应用提供一定的理论依据。