精氨酸酶Ⅰ和诱导型一氧化氮合成酶在肝细胞癌中的表达及其相关性研究

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目的:从mRNA和蛋白质水平检测精氨酸酶Ⅰ(Arginase-1,Arg-1)及诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthetase,iNOS)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况,并探讨二者的表达与HCC临床病理参数的关系及其在预后评估中的价值。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术,从mRNA水平上检测68例HCC、相应癌旁肝组织及8例正常肝组织中Arg-1的表达情况;采用蛋白免疫印迹(Western Blot)方法在蛋白质水平上检测了23例HCC、相应癌旁肝组织中Arg-1及iNOS蛋白表达情况;采用免疫组织化学染色(IHC)方法在蛋白质水平上分别检测了167例HCC、相应癌旁肝组织中Arg-1、iNOS的表达情况;分析Arg-1和iNOS蛋白与HCC的临床病理参数之间的关系及其在预后评估中的价值;分析Arg-1和iNOS蛋白表达的相关性,探讨Arg-1及iNOS在HCC发生发展中的作用。结果:1、Real-time PCR结果发现Arg-1mRNA在68例HCC中的相对表达量为0.0997(0.213),明显低于相应癌旁肝组织0.563(0.459)及正常肝组织1(0),差异有统计学意义(P<0.01)。2、蛋白免疫印迹实验亦证实了HCC中Arg-1及iNOS蛋白的平均表达水平明显低于癌旁肝组织(P<0.01)。3、免疫组化结果显示Arg-1和iNOS蛋白主要在癌旁和正常肝组织中表达,在HCC中低或不表达。半定量积分法检测Arg-1及iNOS在167例HCC中的蛋白表达免疫组化评分显著低于相应癌旁肝组织(P<0.01)。在167例HCC中Arg-1的阳性表达率为44.9%,iNOS的阳性表达率为37.7%,二者表达呈正相关(r=0.214,P=0.002)。随着HCC病理组织学分级的升高及分化程度的降低,Arg-1蛋白表达量逐渐减少(P<0.01),iNOS蛋白表达量亦逐渐减少(P<0.01)。HCC组织中Arg-1蛋白的表达与术前甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)水平、微血管侵犯、术后是否复发等指标有关(P<0.05), iNOS蛋白的表达与微血管侵犯、包膜侵犯有关(P<0.01),二者与HCC患者的性别、年龄、HBV感染、肿瘤数目、肿瘤直径及是否合并肝硬化均无关(P>0.05);4、生存分析显示在HCC中Arg-1蛋白表达可以影响HCC患者术后无瘤生存时间(P<0.05),但并不影响HCC患者术后总生存时间(P>0.05)。iNOS蛋白表达与HCC患者术后无瘤生存时间和总生存时间均无关(P>0.05)。.结论:1、在HCC组织中Arg-1mRNA水平均明显低于相应癌旁肝组织和正常肝组织。2、在HCC组织中Arg-1和iNOS蛋白表达水平明显低于相应癌旁肝组织。Arg-1与iNOS的表达呈明显正相关,二者的表达缺失/下降与肿瘤低分化、侵袭转移有关。3、Arg-1基因表达的缺失或下调可能参与了HCC的发生和发展。iNOS在HCC中的低表达进一步协同了Arg-1低表达的促进肿瘤生长的作用。4、Arg-1、iNOS或可成为评估HCC分化程度的候选蛋白标志物。5、检测Arg-1蛋白的表达有助于评估HCC患者术后的复发风险。
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