研究目的和背景 克罗恩病(CD)的病因尚不清楚。研究发现，CD发病时，肠粘膜免疫功能异常，炎症肠粘膜固有层单个核细胞(LPMC)异常激活、激活的LPMC对激活后细胞凋亡(AICD)抵抗，导致炎症持续。炎症肠粘膜有大量的炎症细胞因子产生，如TNF-α、INF-γ、IL-6、IL-2等，这些细胞因子能激活炎症细胞内的炎症信号分子，如NF-κB和STAT等，这些信号分子在细胞核内与炎症分子基因的启动子结合，调节炎症分子的表达。抑制上述炎症分子机制的正反馈，对相关疾病具有一定的治疗作用。最近临床研究发现，作为IL-6的炎症细胞内信号分子STAT3，可能参与了CD的发病机制。 CD发病时，肠粘膜T细胞异常激活，这些激活的T细胞对AICD存在抵抗。T细胞抵抗AICD与IL-6有关，使用针对IL-6受体的抗体，在细胞外阻断IL-6与IL-6受体结合，能诱导炎症肠粘膜T细胞发生凋亡，最近临床研究证实，该抗体对CD可能有一定的治疗效果。STAT3是IL-6炎症细胞内的信号分子，研究发现，CD患者肠粘膜LPMC表达STAT3增高，并有大量STAT3激活，激活的STAT3可能参与了T细胞抵抗AICD的机制。然而有学者认为，STAT3分子在有的免疫细胞内存在一定的抗炎作用。例如，单核细胞内STAT3基因敲除的小鼠呈现对IL-10低反应性，说明单核细胞内STAT3能被IL-10激活。因此，STAT3蛋白在CD发病中的作用需要进一步研究。 本实验中，我们在与CD免疫反应类型及病理组织学十分类似的小鼠TNBS结肠炎早期，用STAT3反义寡核苷酸(ASON)灌肠，以抑制STAT3的表达和激活，研究STAT3参与该结肠炎发病可能的机制，及抑制STAT3表达是否对结肠炎具有治疗作用。 实验方法 在实验第1天，用0.1ml含2.0mgTNBS的50％乙醇溶液灌肠，用体重约22g的BALB/c小鼠造TNBS结肠炎模型，对照组小鼠仅用0.1ml50％乙醇灌肠。实验第3天，用15nmolSTAT3ASON或错配反义寡核苷酸(MMAS)灌肠治疗。每天记录小鼠体重。 实验第7天处死小鼠，分离炎症最明显处的结肠组织，用4％甲醛固定，HE染色，显微镜下观察组织学形态。 自新鲜的结肠组织中分离出LPMC，经annexinV和PI染色后，流式细胞仪检测LPMC的细胞凋亡，用存活的LPMC百分比来反映LPMC的凋亡情况。提取LPMC细胞总蛋白，Westernblot检测STAT3、磷酸化STAT3(pSTAT3)、及细胞凋亡相关蛋白bcl-2、bax等。 分别用免疫荧光、Westernblot等方法检测每组小鼠结肠炎症组织STAT3、pSTAT3的表达。用PBS对结肠组织进行匀浆，分别检测TNF-α、INF-γ的浓度和组织MPO活性。 结论 LPMC内STAT3的激活参与了TNBS结肠炎的发病机制：调节炎症细胞因子的表达，诱导LPMC对AICD抵抗。用STAT3ASON灌肠早期治疗TNBS结肠炎，能减少炎症细胞因子的分泌，诱导激活的LPMC凋亡。抑制LPMC的STAT3信号途径对CD可能有一定的治疗作用。