【摘 要】
:
红霉素是一种由I型聚酮合酶催化合成的聚酮类化合物。聚酮类化合物具有结构和生物活性的多样性,因此是重要的新药开发来源之一。红霉素对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌都有一定的抑制作用,具有广谱的抗菌活性,常用于治疗皮肤软组织感染、结膜炎、咽炎和肺炎等疾病。通过对红霉素结构的改造产生了一系列红霉素衍生物,这些红霉素衍生物相对红霉素有更强的抗菌活性,对人体毒性更低以及细菌不易产生耐药性等优点。阐述红霉素生物合成
论文部分内容阅读
红霉素是一种由I型聚酮合酶催化合成的聚酮类化合物。聚酮类化合物具有结构和生物活性的多样性,因此是重要的新药开发来源之一。红霉素对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌都有一定的抑制作用,具有广谱的抗菌活性,常用于治疗皮肤软组织感染、结膜炎、咽炎和肺炎等疾病。通过对红霉素结构的改造产生了一系列红霉素衍生物,这些红霉素衍生物相对红霉素有更强的抗菌活性,对人体毒性更低以及细菌不易产生耐药性等优点。阐述红霉素生物合成机理,为设计产生更多新的聚酮类化合物,发现对人类疾病治疗更加有效的药物提供理论基础。DEBS蛋白是催化红霉素生物合成的聚酮合酶,包含三个亚基蛋白,每个亚基均包含两模块。目前DEBS蛋白亚基在大肠杆菌异源表达量低,只有部分截断的结构域的精细结构,尚未获得模块、亚基和全复合物的整体结构的阐释。本研究针对异源表达大蛋白,一般产量较低这一问题,以红霉素合成大机器为研究目标,提高了DEBS蛋白中DEBS2亚基的异源表达水平,同时建立了DEBS3亚基的体外表达纯化体系,获得了高纯度的分子量320k Da的DEBS3蛋白;证明了优化目的基因起始部分序列对大分子量的DEBS2(374k Da)蛋白表达量的提高具有明显的作用,同时对DEBS3蛋白的结构进行初步探索。以异源表达量低的DEBS2为目标,选择其编码区的起始区域的11个氨基酸33bp,设计其简并引物,氨基酸序列不变,通过简并引物和PCR方式随机改变密码子,再通过PCR产物构建到表达载体上,成功筛选到相对出发质粒高表达目的蛋白DEBS2的简并质粒,使得DEBS2蛋白表达量得到显著提高。构建了DEBS3的n Flagc His标签的表达载体,优化了DEBS3蛋白的表达条件:分子伴侣共表达,诱导剂浓度筛选和培养基筛选,最终获得DEBS3蛋白的最佳表达条件:在TB培养基中,大肠杆菌BAP1作为宿主菌,分子伴侣pGro7质粒共表达,终浓度100μM/L的IPTG诱导蛋白过表达,得到了蛋白的可溶性高表达;通过Ni柱亲和层析、Q柱离子交换、Flag柱亲和层析和凝胶过滤层析,对DEBS3蛋白进行了有效的分离纯化,得到了高纯度的DEBS3蛋白;通过负染电镜对DEBS3蛋白结构进行了观察,优化了DEBS3蛋白的缓冲液,初步获得了电镜可观察的蛋白颗粒。目前尚未见红霉素单模块蛋白的结构报道,因此本研究也成功构建了单模块M2、M3、M4、M5和M6的大肠杆菌表达载体,并得到了高纯度的M3蛋白。本研究通过优化目的基因起始序列,成功获得374k Da的高表达DEBS2蛋白的大肠杆菌菌株,使DEBS2蛋白在大肠杆菌中表达量由SDS-PAGE胶图中几乎不可见到可纯化;建立了巨大蛋白红霉素合酶蛋白亚基体外表达和纯化流程,探索了DEBS3蛋白的负染结构。成功获得大肠杆菌中表达的高纯度大蛋白DEBS3,并对其结构进行了探索,为下一步对DEBS2和DEBS3蛋白及红霉素合酶结构的解析奠定基础,并通过基因工程或蛋白质工程等手段定向改造红霉素结构提供理论基础。
其他文献
随着我国机动车保有量的持续增长,对化石能源的需求不断扩大,进而产生了一系列严重的环境污染问题。为有效应对环境污染问题,近年来我国出台了一系列排放法规以降低机动车的污染排放。随着排放法规的不断加严,车用燃油品质也持续得到改善,其中单环芳香烃(即苯系物)是车用燃油的主要组分。与烷烃、环烷烃等其他组分相比,苯系物更易产生碳烟颗粒及多环芳烃(PAH),对大气环境和人体健康造成不良影响。因此对具有复杂支链结
试验选用政府招标的2家公司生产的猪口蹄疫O型灭活疫苗及猪口蹄疫O型-A型二价灭活疫苗共4种疫苗对健康仔猪按免疫程序进行试验,采用ELISA方法检测不同阶段抗体水平,以期评估不同猪口蹄疫疫苗的免疫效果。试验结果表明,2种O型疫苗免疫21 d后,其抗体阳性率就达70%,二免后抗体效价可达8log2~9log2,抗体合格率高达100%,抗体保护力持久;O型-A型二价灭活苗需2次以上免疫,才能产生较好的抗
尽管法院判决不应被舆论左右,但是,如果质疑声得不到专业、权威的回应.各种误解和猜测很可能在传播过程中不断扩大影响,消解司法机关的公信力。司法机关在舆论面前的沉默.甚至会让一些人对法治丧失信心。的确,司法工作要以坚持"以事实为依据,以法律为准绳",不受社会舆论的左右,但这不意味着可以对公众的声音置之不理。在活跃的舆论环境中,司法机关应当自觉接受社会监督,针对公众的质疑多做些解释,这既能提升公众
党的十九大以来,习近平总书记围绕共同富裕发表了一系列重要论述,提出了一系列新思想、新观点、新方法,深刻阐明共同富裕是社会主义的本质要求,也是现代化新征程的内在要求。共同富裕的实质就是在中国特色社会主义制度保障下,中国共产党带领全体中国人民不断促进更平衡更充分的高质量发展,共同创造丰富的物质生活财富和精神生活财富,共同享有高质量发展带来的成果。一、共同富裕是社会主义的本质要求习近平总书记指出,
微观孔洞是低压铸造铝合金铸件的常见内部缺陷,此类缺陷易导致铸件的气密性无法满足技术要求。并且,微观孔洞在产品开发阶段和试制中不容易被识别。本文以一款铝合金电机壳微观孔洞导致渗漏的具体案例,探讨微观孔洞的形成与消除的措施。
目前我国军队院校处于实战化教育训练的大环境下,这对军队院校教员的教学水平和能力素质提出了更新、更高的要求。本文试分析当前军队院校文职人员能力素质与实战化教育训练要求存在的差距,提出如何提升军队院校文职人员实战化教育训练能力素质的对策措施,着力解决军队院校文职人员基层部队实践经验少、对知战教战重要性认识不强、对为战研战能力不强,以及文职人员队伍整体向实战化方向转型难等问题,为军队院校提升文职人员管理
偶氮材料由于其独特的光致异构特性,在光功能器件和光电材料领域发挥着重要作用,偶氮材料光致异构过程的深入研究以及偶氮材料光致异构量子效率的提高有着重要的意义。本文以拉曼光谱为基础研究手段对偶氮苯的光致异构过程进行了研究,提出了增强光致异构量子效率的方法并加以了验证。同时,在拉曼光谱的基础上制备了新型SERS基底,为农药残留检测提供了方法。在第二章中,选取偶氮苯作为研究对象,采用365 nm的紫外光作
被动辐射冷却通过透明大气窗口向太空辐射热量以实现降温效果且无需额外能源输入。通过合理的光子结构设计可实现反射率和发射率的有效调控,然而大面积低成本的制备光子结构材料以实现高效辐射冷却效果仍是目前面临的关键难题。自然界中的某些生物进化出具有宽带反射及热调控能力的独特精细光子结构,可为新型辐射冷却结构材料的设计和制备提供设计思路和模型支持。本课题聚焦生活在热带地区的巨瘤角天牛(N.gigas),通过形
自2014年教育部发布《关于全面深化课程改革落实立德树人根本任务的意见》以来,新课程改革工作不断推行并深化,至今已经取得了一定的成效。《意见》中指出,"教育部将研究制定学生发展核心素养体系,各级各类学校要从实际情况和学生特点出发,把核心素养和学业质量要求落实到各学科教学中"。语文作为中学阶段重要的基础课程之一,应从文化、语言、思维、审美等方面着手,培养学生终身发展和社会可持续发展所必须具备的