仿刺参幼参对不同刺激的应激机制及维生素C、E抗应激作用研究

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设置了不同剂量的维生素C(Vitamin C)和维生素E(Vitamin E)分别添加到仿刺参幼参饲料中,尝试降低其对不同刺激的应激反应。商品饲料作为对照日粮,在对照日粮基础上,另外分别添加3个浓度梯度的vitamin C1000,1500以及2000mg kg-1以及3个浓度梯度的vitamin E150、250、350mg kg-1分别获得vitamin C添加组日粮和vitamin E添加组日粮。试验动物选用初重约为2.5g的仿刺参幼参,分为对照组、vitamin C添加组(内有3个浓度梯度)、vitamin E添加组(内有3个浓度梯度),共计1个对照组和6个处理组,每组3个平行,每个平行放入500g幼参。试验养殖周期为45d,每15d设置一个应激试验时间点,在试验进行第0、15、30和45d取样。共设置两种刺激方式:亚硝酸盐和盐度变化。饲喂vitamin C饲料添加处理组的仿刺参幼参进行亚硝酸盐和盐度应激,vitamin E饲料添加处理组只进行亚硝酸盐应激试验。应激试验开始时,将对应饲料处理组的仿刺参幼参迅速放置到配好的浓度为0.5、1.0和1.5mg L-1亚硝酸盐溶液中以及盐度分别为20ppt和40ppt的海水中,应激进行12h,在0、4和8h进行取样,液氮速冻后置于-80℃冷藏备用。整个试验期间动物生长性能作为评价标准之一。测定氧自由基相关指标,如羟自由基(-OH)含量、丙二醛(MDA)和总抗氧化能力(T-AOC),以及抗氧化酶活性如超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性。响应面(Response surface method)分析法用作分析各变量相互作用以及vitamin C、E最优化添加量和养殖天数。结果获得了在不同亚硝酸浓度和盐度应激条件下,刺参幼参氧自由基和抗氧化酶活性变化情况:在亚硝酸盐应激条件下,-OH和MDA含量随应激时间延长和亚硝酸浓度升高而迅速升高,显著高于对照组(P<0.05),而T-AOC呈现出与之相反的趋势;抗氧化酶活性呈现先升高后降低的趋势。从生长性能看,添加Vitamin C或Vitamin E组均显著高于对照组。Vitamin C或Vitamin E添加后,-OH和MDA含量随养殖时间延长和添加量增加呈减少趋势,而T-AOC呈增加趋势。根据响应面二次回归方程,有效降低亚硝酸盐应激的Vitamin C添加量是1400–2000mgkg-1日粮,养殖时间是29–35d;而Vitamin E最优添加量则是180-260mg kg-1日粮,养殖时间是29-35d。在不同盐度应激条件下,发现无论是在20ppt或在40ppt处理组时,-OH和MDA值均显著高于在30ppt (P<0.05),T-AOC则显著下降,此外,研究发现20ppt处理组-OH要显著高于40ppt处理组,而T-AOC则低于40ppt组,表明仿刺参幼参在低盐(20ppt)应激时氧化损伤可能要高于高盐(40ppt)应激,可能仿刺参幼参对高盐的抗性高于其对低盐的抗性。抗氧化酶SOD和CAT酶活性在应激时间12h内保持较高的酶活水平,均高于30ppt组。Vitamin C添加后,-OH和MDA值均出现降低趋势,T-AOC出现增加趋势,显示出Vitamin C添加对降低盐度应激氧化损伤起到了显著作用。根据响应面法二次回归曲线方程,获得能够有效降低盐度应激的Vitamin C最优补充添加量为1697-2000mg kg-1,养殖天数为34-37d。总之,上述研究结果对研究刺参不同应激机制和有效降低应激反应,提供了理论依据,并对生产实践如何高效使用Vitamin C、Vitamin E降低应激反应提供了指导。
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