烟草和杨树核基质附着区(MARs)的分离及其功能分析

来源 :西北农林科技大学 西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:woshihanxue
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
  本文采用两种不同的方法分别从烟草和欧洲黑杨中分离出核基质附着区,并把它们构建到植物表达载体中,研究它们对转基因表达的调控作用。   以PCR方法从烟草基因组中扩增到两个DNA片段(M14和M17)的序列分析表明,它们具有90﹪A-Tbox,A-box,T-box,拓扑异构酶Ⅱ识别位点,自主复制序列(ARS),碱基非配对区(BUR),MAR识别序列(MRS),复制起始点(ORI),弯曲DNA序列等典型的MAR序列特征。将它们分别构建到植物表达载体pCAMBIA2301GUS基因(uidA)表达盒一侧及两侧,通过农杆菌介导转化烟草。组织化学染色法定性检测GUS活性表明,带有M14和M17的uidA基因在转基因烟草中稳定表达。GUS活性的定量检测表明,表达载体uidA基因一端或两端连接有MAR的转化烟草中,GUS的表达水平与对照相比都有了明显提高,而uidA基因两侧连有MAR的载体其提高表达水平的效果优于一端连有MAR的载体,可使GUS活性增强3.14倍,但不同转化个体之间表达水平的差异仍然明显。上述结果表明,所得DNA序列为两条新的MAR片段,并且具有提高转基因表达水平的功能。   采用高盐方法从欧洲黑杨悬浮细胞中分离到两个DNA片段,并对它们的序列进行了详细的分析。发现它们具有MARs序列的部分特征基元如:90﹪A-Tbox,A-box,T-box,拓扑异构酶Ⅱ识别位点,自主复制序列,碱基非配对区,MAR识别序列,复制起始点,弯曲DNA序列等。将它们构建到植物表达载体pCAMBIA1305.1中GUS基因(uidA)表达盒一侧,通过农杆菌介导转化烟草。组织化学染色法定性检测GUS活性表明,uidA基因在转基因烟草中稳定表达。GUS活性的定量检测表明,含有单拷贝A7、A23的转化烟草中GUS的表达水平与对照相比,不但没有提高,反而低于对照,说明插入的MAR片段对uidA基因的表达没有起到增强作用,反而抑制其表达。 研究结果表明,MARs具有多样性,不同的MARs可能执行着不同的功能。有些MARs不能降低转基因表达的差异,这说明并非所有的MARs都具有边界因子的功能或消除转基因沉默的能力;一些MARs不仅具有一般的特征,还具有其特异性,这种特异性使对MARs功能的研究复杂化,用不同的MARs序列研究的结论很可能是不一致的。  
其他文献
The risk of myocardial infarction increases in patients with diabetes mellitus. The incidence of myocardial in-farction is similar in patients with type 2 diabe
Background The prognostic value of serum C-reactive protein (CRP) in patients with infective endocarditis (IE) is not well elucidated.This study aimed to evalua
小麦面粉色泽是最重要的小麦品质性状之一,对小麦色泽的遗传改良已然成为小麦品质育种的重要目标之一。籽粒中的脂肪氧化酶(Lipoxgenase,简称LOX)会偶联氧化小麦面粉中的类胡萝卜素进而使小麦粉生物漂白,是影响面粉色泽的重要因素,而过高的LOX活性则会造成小麦品质的劣变及营养价值的流失。因此,研究LOX基因的分子遗传机理对改良小麦品质具有重要意义。本研究选用来自我国黄淮麦区的306份小麦种质资源
教师素养的高低决定教育质量的优劣,全面提升教师师范教育理念,是推进新课改工作扎实有效开展的基础和前提.文章采用问卷法、访谈法等研究方法分析探讨了T大学教师师范教育理
青贮专用玉米是反刍动物重要的粗饲料来源,选育新型的青贮玉米品种,创新种质资源,调整青贮专用玉米育种目标是改善目前我国反刍动物粗饲料生产,提高养殖效益最有效的措施。本研究以糯玉米(京科糯2000、黑糯1号、黑糯191)、粮饲兼用型玉米(郑单958、先玉335、浚单20)、青贮专用型玉米(北青210、曲辰九号、50096×50923)为试验材料。研究不同类型玉米散粉后的生物产量和干物质产量积累规律以及
Background Taxifolin (Tax) is an essential natural antioxidant.Multiple studies have shown that Tax can protect cardiomyocytes from ischemia-reperfusion injury.
[摘 要] 教育治理由多元主体共同管理教育公共事务,它是一种新型的民主的形态。目标是实现教育治理体系的现代化,即建立一种高效的、规范的、自由的、有序的教育新格局。推进高等教育治理的关键,是解决教育管理中政府宏观管理能力不足、学校办学自主权不够、社会参与度不够、学校内部治理结构不完善等突出问题,通过采取明确政校责任、社会问责和大学内部组织构架政策,对于推动中国高等教育治理现代化具有十分重要的战略意义
Objectives To evaluate the efficacy and safety of clinical application of a novel type of vascular closure device named Boomerang closure wire system (BCWS). Me