【摘 要】
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目的:研究热休克蛋白90(HSP90)新型抑制剂17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-dimethylaminoethylamino-17-demethoxygeldanamycin,DMAG)对白血病细胞株HL-60的抑制作
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目的:研究热休克蛋白90(HSP90)新型抑制剂17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-dimethylaminoethylamino-17-demethoxygeldanamycin,DMAG)对白血病细胞株HL-60的抑制作用及相关作用机制,并探讨DMAG与化疗药物柔红霉素(DNR)联合应用的协同性。方法:对DMAG作用后的HL-60细胞在光镜、透射电镜下观察形态学变化;通过MTT法、流式细胞术检测细胞在DMAG和DNR作用下增殖情况及凋亡率的改变;运用流式细胞术检测DMAG作用后的HL-60细胞周期的改变;对DMAG作用后的HL-60细胞应用流式细胞术及Westen Blot法检测Raf蛋白含量,应用RT-PCR法检测raf-mRNA表达量的变化,探讨DMAG的作用机制。结果:DMAG作用后的HL-60细胞光镜下体积变小、不规则,细胞密度降低,电镜下超微结构出现染色质浓集、沿核膜形成收缩的新月状体等凋亡表现。MTT法检测显示DMAG能抑制HL-60细胞的生长,并且随着药物浓度的升高、作用时间的延长抑制率明显提高,具有浓度、时间依赖性,72h半数抑制浓度(IC50)为0.488μM;DMAG与DNR对HL-60细胞的生长抑制具有协同作用,两药相互作用指数(CDI)<1.0,二者一起作用时对HL-60细胞的抑制率明显提高,流式细胞术也显示联合应用能引起更多HL-60细胞的凋亡。应用流式细胞术对HL-60细胞周期分析显示,DMAG作用后G0/G1期细胞明显增多,S期细胞相应减少。对DMAG作用后的HL-60细胞应用流式细胞术及Westen Blot检测,证实DMAG能降低HL-60细胞Raf蛋白的含量,但RT-PCR检测发现raf-mRNA表达量没有明显变化。结论:DMAG能引起HL-60细胞的凋亡,抑制其生长,并与DNR有协同作用。DMAG引起HL-60细胞凋亡的机制与降低Raf蛋白含量有关。
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